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- 2025年07月10日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
36
- 英文名：
M15 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1 mL×10
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
M15 感受态细胞0.1 mL×10品牌详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是M15 感受态细胞0.1 mL×10品牌的相关产品：
m7G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物25 OD 电泳级 SYBR Green I50μL
G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物25 OD 电泳级 MOPS100g
G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物25 OD 第五章 核酸扩增产品
3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物25 OD 第四章 探针标记及检测产品
NTP 溶液，10mM0.5mL 第三章 “归去来”核酸电泳及回收产品
一步法质粒 DNAout 2.050 次 微量蛋白沉淀试剂盒50 次
一步法质粒 DNAout 2.0100 次 微量单链 DNA 定量试剂盒1mL
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次 微量 RNA 助沉剂0.1mL
一步法大提质粒 DNAout5次 微量 RNA 定量试剂盒1mL
一步法 96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )1次 微量 DNA 助沉剂0.1mL
土壤腐殖酸清除剂100mL 预混型丙 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g
一步离心式石蜡清除剂100 次 预混型丙 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)100g
菌体内毒素清除剂200mL 鱼类种属鉴定 PCR Mix100 次
红细胞裂解液 A 型 ( 核酸纯化 ) 100mL 荧光尺1个
红细胞裂解液 B 型 ( 流式细胞分析用 ) 100mL 银染清除剂30 次
鲍曼不动杆菌 缺陷短波单胞菌 ATCC 19146
营养琼脂培养基90mm 生孢梭菌CMCC64941冻干粉
紫红曲霉 地衣形芽孢杆菌
蜃楼耶尔森氏菌 紫红曲霉
卡尔斯伯酵母 深红酵母
短裙竹荪东北变种 浅天蓝链霉菌 Streptomyces coerulescens
硫乙醇酸盐平板培养基70mm 胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基60mm/25cm2
弗氏柠檬酸杆菌 乙酸钙不动杆菌
豇豆慢生根瘤菌 平展米曲霉（米曲霉平展变种）
新月弯孢霉 香蕉炭疽盘长孢菌
M15 感受态细胞0.1 mL×10品牌褐球固氮菌 丙丁醇梭菌（丙丁醇杆菌） 利用玉米原料生产丙丁醇
韩国丛毛单胞菌 粪链球菌
青色链霉菌 猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种 试验用菌
葱头伯克氏菌 金黄色葡萄球菌ATCC6538冻干粉
黄色长孢链霉菌 产朊假丝酵母
操作步骤:
1. M15 感受态细胞0.1 mL×10品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验) Media LB or SOB medium for initial growth of culture LB (Luria-Bertani) Medium Per Liter: To 950 ml of deionized H2 O , add: Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g
5mlLB培养基中，于37℃培养3－5小时 3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2－3小时，到OD600＝0.3－0.4感受态细胞制备: 4.将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min 5.4000rpm离心5min,弃上清 6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，冰上预冷10min 7.4000rpm离心5 min,弃上清 8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总体积15％的甘油 可－70℃长期
min离心10min（从这一步开始，所有操作均在冰上进行，速度尽量快而稳）；(3) 倒净上清培养液，用1ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰浴；(4) 0～4℃，4000r／min离心10min；(5) 弃去上清液，加入500µll冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞。0～4℃，4000r／min离心10min；(6) 弃去上清液，加入100µl冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞，冰上放置片刻后，即制成了感受态细胞悬液；(7) 制备好的感受态细胞
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