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- 2025年07月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
28
- 英文名：
Rosetta(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
1）Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
以下是Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
HB101 化学感受态细胞0.1mL×10 包涵体蛋白溶解及复性套装100 次
JM109 化学感受态细胞0.1mL×10 包涵体大量纯化试剂盒2次
SURE 化学感受态细胞0.1mL×10 百万碱基级植物 DNAout 10 次
TG1 化学感受态细胞0.1mL×10 百万碱基级真菌 DNAout10 次
Top10 化学感受态细胞0.1mL×10 百万碱基级血液 DNAout10 次
柱式细菌 DNAout( 含溶菌酶 )50 次 新生霉素溶液 ,50mg/mL5mL
大提柱式细菌 DNAout4次 辛甲基硫吡喃葡萄糖苷 (OTG)5g
大提柱式细菌 DNAout( 含溶菌酶 )4次 辛甲基 β 葡糖苷1g
百万碱基级细菌 (G-)DNAout10 次 心肌细胞生长因子5mL
百万碱基级细菌 (G+)DNAout10 次 小鼠肿瘤细胞分离液 1.070200mL
小胶质细胞生长因子5mL DNA 上样液 ( 蓝 ),6×10mL
心肌细胞生长因子5mL DNA 上样液 ( 蓝 ),6×( 非甘油 )10mL
星形胶质细胞生长因子5mL DNA 上样液 ( 红 ),6×10mL
星形细胞生长因子5mL DNA 上样液 ( 红 ),6×( 非甘油 )10mL
雪旺细胞生长因子5mL DNA 溶解液10mL
白色葡萄球菌 大肠埃希氏菌(大肠杆菌)
希瓦氏菌 越南伯克霍尔德氏菌
产色链霉菌 西伯利亚库特氏菌 模式菌株
苏云金芽孢杆菌猝倒亚种 表面培养基60mm/25cm2
白色念珠菌冻干粉 成团肠杆菌(成团泛菌)
丁香假单胞菌 黏质沙雷菌冻干粉
尘埃芽孢杆菌 抗辐射不动杆菌
胶质芽孢杆菌 不动杆菌属
乳酸乳球菌乳亚种 凸圆灵芝(白芝)
铜绿假单胞菌ATCC27853冻干粉 香蕉炭疽盘长孢菌
Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌哈茨木霉 纤维素链霉菌 Streptomyces cellulose
金顶侧耳、榆黄磨、金顶磨 苏云金芽胞杆菌以色列亚种 Bacillus thuringiensis subsp. israelensis
阴沟肠杆菌(阴沟肠杆菌阴沟亚种) 卧孔菌
金黄色葡萄球菌CMCC26003冻干粉 糙皮侧耳、平菇
糖化酵母 总状毛霉
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
性不利，容易出现质粒丢失、表达水平不稳定、菌株退化乃至发生污染等情况。 我们建议： 1、长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油－70℃保种。但是要注意高浓度甘油(>10%)会导致质粒不稳定。请尽量保持甘油浓度8％。（15%浓度的甘油保种液和新鲜菌液1:1就行）2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株（带DE3的大肠杆菌）中，请尽量使用带有recA endA突变的克隆菌株（比如C600，DH5a）进行质粒抽提和保存质粒。表达型的菌株提质粒经常会有质量不高或者背景的问题。特别是大量抽提。
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