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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
32
- 英文名：
Tuner(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌详细介绍：
操作步骤:
1. Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
以下是Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌的相关产品：
KT5823(PKG 抑制剂 )50μg Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL
L-Arginine(NO 前体 )5g BLOTTO 溶液100mL
L-Canavanine(iNOS 抑制剂 )20mg BL21-CodonPlus(DE3) 感受态细胞10×100μL
L-Citrulline(NO 中间体 )1g BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞0.1mL×10
Leptomycin B( 出核转运抑制剂 )10μg BL21(DE3) 化学感受态细胞0.1mL×10
柱式病毒 DNAout50 次 细菌膜蛋白质微量提取试剂盒50 次
96 孔板病毒 DNAout( 离心法 )1次 细菌蛋白酶抑制剂10mL
96 孔板病毒 DNAout( 离心法 )5次 细菌 RNAout250 次
96 孔板病毒 DNAout( 真空法 )1次 细菌 RNAout100 次
一管式病毒 DNA-RNAout50 次 细菌 DNAout50 次
无包被磁珠2mL 酸酚100mL
第三章 “归去来”核酸电泳及回收产品 丝状真菌线粒体 DNAout15 次
一站式 RNA 电泳套装10 次 C 溶液 ,5mg/mL10mL
一站式 DNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次 水蛭素溶液，2mg/mL0.1mL
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次 水样病毒沉淀剂10 次
棒曲霉 深黄被孢霉
紫色直丝链霉菌 改良马丁琼脂培养基70mm
克柔念珠菌冻干粉 桃色欧文氏菌
梨形毛霉 叶柄粘球菌
苏云金芽胞杆菌猝倒亚种 Bacillus thuringiensis subsp. sotto 李克犁头霉或伞枝梨头霉
冬虫夏草 刺孢吸水链霉菌北京变种 Streptomyces hygrospinosus var. beigingenis
血链球菌 脱硫弧菌脱硫亚种（脱硫微螺菌、脱硫螺菌、脱硫杆菌、脱硫芽孢弧菌、脱硫弧菌）
英诺克李斯特菌 许旺酵母变种
产紫青霉 滑菇、光帽黄伞
橄榄包毛壳 拟热带假丝酵母
Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10品牌海洋盐单胞菌 根癌土壤杆菌 Agrobacterium tumefaciens
胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基60mm/25cm2 镰刀菌 Fusarium sp.
荚膜红细菌 粪产碱菌 Alcaligenes faecalis
土壤伯克氏菌 宋内志贺菌CMCC51592冻干粉南京便诊
匍匐放射毛霉或雅致放线毛霉 串珠镰孢
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
High Level Expression of Recombinant Proteins in E. coli
) plus pRARE Tuner(DE3) lacZY deletion mutant ADA494(DE3) trxB mutant Origami(DE3) trxB and gor mutations Expression Plasmid Elements Origin of Replication (ColE1) Selectable marker (ampicillin, kanamycin or chloramphenicol resistance)
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