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- 广州
- 2025年12月06日
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云舟生物科技（广州）股份有限公司
- 服务名称：
提供定制载体
概述
该载体系统设计用于有效分析小鼠模型中的哺乳动物启动子。通常，将假定的目标启动子克隆到该载体中，在LacZ报告基因的上游，所得构建体用于制造转基因小鼠。然后，可以将LacZ报告基因在转基因胚胎或成年小鼠中的表达用作启动子活性的读数。
该载体系统可用于鉴定启动子元件、确定启动子的组织特异性、比较启动子变体、谱系追踪和许多其他应用。
亮点
我们的载体基于常规质粒系统。要测试的推定启动子被放置在LacZ报告基因的上游。虽然活性启动子会驱动下游LacZ基因的表达，但在没有启动子活性的情况下，LacZ表达很少或没有。使用LacZ作为报告基因，因为在整个安装胚胎或组织切片中通过X-gal对LacZ进行比色染色，可以高度灵敏地原位检测启动子活性。
优势
易产生转基因动物：该结构可以很容易地用于通过常规原核注射高效制造转基因胚胎或活小鼠。
简单灵敏的读数：当使用LacZ作为报告基因时，X-gal染色会产生鲜艳的蓝色产物，即使在低表达水平下也很容易检测到，从而非常灵敏地读取启动子活性。
技术简单：通过常规转染或注射将质粒载体递送到细胞中在技术上很简单，并且比需要包装活病毒的基于病毒的载体容易得多。
非常大的载货空间：我们的载体可以容纳~30 kb的总DNA。这允许测试大的假定启动子序列。
不足之处
随机整合到宿主基因组中： 当载体用于通过原核注射制造转基因小鼠时，载体的一个或多个拷贝可以随机整合到宿主基因组中。整合位点的相邻基因组序列，加上拷贝数变异和整合片段不同程度的咀嚼，可能会影响报告基因表达的水平和特异性。为了克服这个问题，给定的构建体通常需要多个转基因系，以便识别多个系之间共享的共同表达模式，这很可能是启动子呈现的真实模式。
载体关键元件
Promoter: Your promoter of interest is placed here.
LacZ: The beta-galactosidase reporter gene. The encoded enzyme converts the colorless and soluble X-gal to an intensely blue insoluble product that stains the cells in which LacZ is expressed.
SV40 early pA: Simian virus 40 early polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.
Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.
pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.
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文献和实验有关该矢量系统的更多信息，请参阅以下论文。
| 引用 | 主题 |
|---|---|
| 计算机化学 23：191 （1999） | 真核启动子预测研究进展 |
| 生物学杂志 273：10530 （1998） | 使用lacZ报告质粒分析体内启动子活性 |
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