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- PiggyBac启动子测试载体（用于体内启动子测试）
- 广州
- 2026年02月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
云舟生物科技（广州）股份有限公司
- 服务名称：
定制载体
概述
该载体系统设计用于利用piggyBac转座子系统有效分析小鼠模型中的哺乳动物启动子。通常，将假定的目标启动子克隆到该载体中，在LacZ报告基因的上游，所得构建体用于制造转基因小鼠。然后，可以将LacZ报告基因在转基因胚胎或成年小鼠中的表达用作启动子活性的读数。该载体系统可用于鉴定启动子元件、确定启动子的组织特异性、比较启动子变体、谱系追踪和许多其他应用。
我们基于piggyBac转座子的载体系统对于将外源DNA插入哺乳动物细胞的宿主基因组非常有效。该系统在技术上很简单，利用质粒（而不是病毒转导）将您感兴趣的基因永久整合到宿主基因组中。
piggyBac系统包含两个载体，均被设计为大肠杆菌质粒。一种载体，称为辅助质粒，编码转座酶。另一种载体称为转座子质粒，包含两个倒置末端重复序列（ITR），包围要转座的区域。将感兴趣的启动子序列克隆到该区域。当辅助质粒和转座子质粒共进样或共转染到靶细胞中时，辅助质粒产生的转座酶将识别转座子上的两个ITR，并将包括两个ITR在内的侧翼区域插入宿主基因组。插入通常发生在包含 TTAA 序列的宿主染色体位点，该序列在转位后在整合片段的两侧复制。
PiggyBac是II类转座子，这意味着它以剪切和粘贴的方式移动，从一个地方跳到另一个地方而不会留下副本。（相比之下，I 类转座子以复制和粘贴的方式移动。由于辅助质粒只是短暂地引入宿主细胞，因此它会随着时间的推移而丢失。随着辅助质粒的丢失，转座子在宿主细胞基因组中的整合成为永久性的。
亮点
编辑
我们的载体基于piggyBac转座子系统。要测试的推定启动子被放置在LacZ报告基因的上游。虽然活性启动子会驱动下游LacZ基因的表达，但在没有启动子活性的情况下，LacZ表达很少或没有。使用LacZ作为报告基因，因为在整个安装胚胎或组织切片中通过X-gal对LacZ进行比色染色，可以高度灵敏地原位检测启动子活性。
编辑优势
编辑
简单灵敏的读数：当使用LacZ作为报告基因时，X-gal染色会产生鲜艳的蓝色产物，即使在低表达水平下也很容易检测到，从而非常灵敏地读取启动子活性。
易产生转基因动物：该构建体可以很容易地用于通过常规原核注射高效产生转基因胚胎或活小鼠。
技术简单： 通过常规转染或注射将质粒载体递送到细胞中在技术上很简单，并且比需要包装活病毒的基于病毒的载体容易得多。
载体DNA的永久整合： 使用常规质粒导致DNA几乎完全瞬时递送到宿主细胞中，因为DNA会随着时间的推移而丢失。这个问题在快速分裂的细胞中尤为突出。相比之下，由于转座子整合到宿主基因组中，转染或注射piggyBac转座子质粒和辅助质粒可以将转座子上携带的DNA序列永久递送到宿主细胞中，从而可以进行长期观察。
非常大的载货空间：我们的转座子载体可以容纳~30 kb的总DNA。这允许测试大的假定启动子序列。
不足之处
需要辅助质粒： 与常规质粒启动子检测载体不同，piggyBac载体系统需要使用两个质粒，一个辅助质粒和一个转座子质粒。为了有效地将启动子序列插入宿主基因组，两个质粒必须存在于相同的细胞中。
载体关键元件
5' ITR: 5' inverted terminal repeat. When a DNA sequence is flanked by two ITRs, the piggyBac transposase can recognize them, and insert the flanked region including the two ITRs into the host genome.
Promoter: Your promoter of interest is placed here.
LacZ: The beta-galactosidase reporter gene. The encoded enzyme converts the colorless and soluble X-gal to an intensely blue insoluble product that stains the cells in which LacZ is expressed.
SV40 early pA: Simian virus 40 early polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.
3' ITR: 3' inverted terminal repeat.
Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.
pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.
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文献和实验有关该矢量系统的更多信息，请参阅以下论文。
| 引用 | 主题 |
|---|---|
| 计算机化学 23：191 （1999） | 真核启动子预测研究进展 |
| 摩尔细胞生物化学。354:301 (2011) | 回顾piggyBac系统 |
| 细胞。122:473 (2005) | 在哺乳动物细胞和小鼠中有效转座小猪Bac（PB）转座子 |
上(即表达)荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活体观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如萤光探测器或改进后的光学显微镜 探测到。这就使得对包括感染在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。 荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件和反式作用因子、药物筛选、sirna 和miRNA筛选、分泌途径及蛋白定位报告基因检测、活细胞的实时动态研究、信号转导通路分析、难转染的细胞(包括干细胞和原代细胞)的研究
是一种功能强大的分析工具，可用于基因或基因产物的功能和调控研究，用于生成转基因生物，并用作基因治疗方法。 基因表达 转染最常通过使用质粒载体或 mRNA 在培养细胞(或动物模型)中表达目的蛋白。利用真核细胞中的蛋白表达可以生成经过适当折叠和翻译后修饰的重组蛋白。另外，将带有可检测的标记物及其他修饰的蛋白质导入细胞，可用于启动子和增强子序列或蛋白: 蛋白相互作用的研究。 此外，根据转染策略的不同，转染还可应用于各种形式的生物生产。例如，导入重编程转录因子可以生成诱导多能性干细胞（iPSC）。另一
。这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。4. siRNA表达载体多数的siRNA表达载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹siRNA在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol
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