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- 详细信息
- 技术资料
- 品牌：
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- 货号：
2001-1K
- 产地：
中国
- 库存：
大量
- 规格：
96T
基因高效快速表达试剂盒介绍（第四版）
（菌种部分修改TOP10为JM109，冻干菌种变为穿刺菌种！）
名称 基因高效快速表达试剂盒
货号 2001-1K
包装规格 一家实验室购买一套可永久无限次使用
试剂盒组成 （1）9种表达载体
（2）2种冻干菌种
（3）2种抗生素
一、产品简介
二、基因克隆
三、基因表达
四、载体资料
五、相关产品
六、参考文献
七、试剂盒质量验收标准
一、产品简介
原核表达系统近年来研究取得突破性进展
1998年，美国Incyte Pharmaceutical公司华裔科学家Zhang Yang在《Protein expression and purification》(vol12,159-165)上发表论文《Expression of Eukaryotic proteins in soluble form in Escherichia coli》，文章采用E.coli分子内伴侣DsbA技术将IGF-I、IGFBP-3、3Cproteinase、TGFb-2、STGFb-RII、BDNF、GDNF、mEGFBP、Leptin和GFP十个基因全部实现了可溶性表达，且表达量均大于25%。更为惊奇的是由于DsbA分子伴侣的作用使得拥有9个半胱氨酸的复杂结构的IGFBP-3能在E.coli内形成可溶性具生物活性的高表达重组蛋白。
2002年，美国冷泉港实验室出版的《Protein Science》(2002,11:313-321)上发表了瑞典科学家Torleif《Rapid screening for improved solubility of small human proteins produced as fusion proteins in Escherichia coli》一文，从而揭开了原核高效快速组合筛选表达系统用于蛋白组学研究的序幕。
近年来Medline报导了大量利用原核表达获得有活性的可溶蛋白，现举例如下：
内容过大(请来电索取13788987962)
产品特色
上海西宝生物科技有限公司通过和留美学者合作，现向国内推出原核基因高效快速表达试剂盒。它将九种表达载体包括分泌型、引导分泌型、胞内直接表达型、分子内伴侣协助折叠型、高度稳定伴侣型等系统的多克隆位点统一，同时统一了诱导表达剂和统一了培养基，一次可以同时克隆九种载体进行表达筛选，极大地节省宝贵的科研时间。其实，象美国Amgen、Gentech、Incyte这类顶尖的生物技术公司也是采用多系统多载体同时筛选快速表达的策略。这一策略的最大优势就是快速且成功率高。本系统非常适合高通量快速筛选大量未知基因，对基因组学和蛋白组学的研究是一个不可缺少的工具。
1）冻干菌种可长期稳定保存。
2）提供详实的操作说明和丰富的参考文献。
3）下游多种亲和层析组合方便您快速纯化目的蛋白。
4）分子内伴侣和分泌表达能最大限度避免包涵体形成，直接获得有活性可溶蛋白，这一点对于未知基因功能的研究很重要。
5）九套高效表达载体同时克隆筛选极大地节省您宝贵的科研时间。
6）T7溶菌酶和lacIq阻遏蛋白能起到严格控制诱导前表达的作用，同时强启动子、高拷贝复制子等方法结合可获得高达50%的表达量。
7）已有200多个基因通过该试剂盒表达成功。
本试剂盒包括冻干菌株、抗生素和统一多克隆位点的九种表达载体。用户只要扩增出一段不带终止密码子或带终止密码子的阅读框编码基因克隆进九种表达载体，可同时筛选，节省时间。一般两至三周可以筛选出表达菌株，在此基础上，进一步根据需要进行实验室菌株的优化从而成为工程菌株。
本试剂盒采用的技术路线如下：
本试剂盒由上海西宝生物科技有限公司与留美学者共同开发并在中国申请了组合发明专利。由于大肠杆菌表达系统遗传背景清楚、易于大规模发酵等优点，尤其是近年来采用分子内伴侣的技术（如Trx、DsbA等）使得许多外源基因能在E.coli里正确折叠，如IL-11、GM-CSF、INF、 Insulin甚至包括结构复杂的tPA等均可获得正确折叠的重组可溶性活性蛋白，使得E.coli高效快速表达系统仍然是分子生物学实验室一个不可缺少的工具。
本试剂盒包括冻干菌株、抗生素和统一多克隆位点的九种表达载体。用户只要扩增克隆出一段不带终止密码子或者带终止密码子的阅读框编码基因克隆进九种表达载体，可同时筛选，节省时间。一般两至三周可以筛选出表达菌株，在此基础上，进一步根据需要进行实验室菌株的优化从而成为工程菌株。
pLLP-OmpA表达载体采用E.coli强启动lpp和===============(请电话联系,详细资料)=======================这样与突变后的DsbA融合可实现许多基因的胞内可溶性有活性的高表达（表达量大于30%），如IGF-1、IGFBP、EGF、Insulin等。
本试剂盒还将两种E.coli菌株冻干方便长期保存。
二、基因克隆
1、本试剂盒选用两种大肠杆菌菌株
两者基因型分别为：
E.coli TOP10F¢
Fˊ{lacIq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 deoR recA1 araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(StrR)endA1 nupG
E.coli BL21(DE3)plysS
F- ompT hsdSB (rB-mB-)gal dcm(DE3)pLysS(CamR)
2、两种大肠杆菌菌株使用情况
这一点非常重要，务必分清。
（1）九种载体的扩增须采用E.coli TOP10F¢，而不能采用E.coli BL21(DE3)plysS。
（2）九种载体的目的基因克隆须采用E.coli TOP10F¢，而不能采用E.coli BL21(DE3)plysS。
（3）克隆了目的基因的表达载体，其中1、2、3、4和8号载体即pLLP-OmpA、pLLP-STII、pMBP-P、pMBP-C和pTrc-CKS应转化进E.coli TOP10F¢进行诱导表达。5、6、7和9号载体即pET-GST、pET-Trx、pET-His和pET-DsbA应转化进E.coli BL21(DE3)plysS进行表达。
3、原始种子库和实验种子库的建立
一般分子生物学+++++++++(请电话联系)+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++PCR引物设计时BamHI和EcoRI位点的5¢端保护碱基有2至3个GC即可，而XbaI、NheI和SpeI位点5¢端保护碱基须在5个左右才容易被酶切割。
6、我们建议您PCR产物先克隆至T-载体上，选单菌落进行DNA序列分析正确后，再进行克隆表达。这是由于PCR扩增过程中容易出错，直接进行表达分析相关因素就更复杂了。
7、基因克隆后建议您通过双酶切或PCR或DNA测序鉴定确认。
基因高效快速表达试剂盒载体测序引物
联系人:张经理
手机：13788987982
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单位：上海西宝生物科技有限公司
地址：上海张江高科技园区（第一上海中心）毕升路299弄11-502
邮编：201204
电话：021-50272975/76/77/78-6221
邮件：trade@cxbio.com MSN:madison03112@hotmail.com
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网址: www.seebio.cn
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