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- 上海研生
- YS-0773RD
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50ng
操作流程：
1.可保种型蓝白 T 载体50ng说明书根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
详细介绍：
以下是可保种型蓝白 T 载体50ng说明书的相关产品：
78-5000 pg/mL 人肌动蛋白抑制蛋白1(PFN1)ELISA试剂盒
15.6-1000 pg/mL 人降钙素原(PCT)ELISA试剂盒
GNGT1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
78-5000 pg/mL 人Apelin 13(APLN13)ELISA试剂盒
FUT4 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P 50 µg
0.312-20 ng/mL 蜡样芽孢杆菌(BC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
0.156-10 ng/mL 人RPE脊椎蛋白(RPESP)ELISA试剂盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Nociceptin receptor
FABP2 / I-FABP 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
0.312-20 ng/mL 人β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)ELISA试剂盒
可保种型蓝白 T 载体50ng说明书(R)-N-去乙基奥昔布宁盐酸盐 (R)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride 181647-12-1 质量规格：美国进口
柠檬烯;Cinene CAS 规格： 100mg 订购|咨询
α-去环己基-α-苯基奥昔布宁 α-Descyclohexyl-α-phenyl Oxybutynin 14943-53-4 质量规格：美国进口
蔓荆子黄素;Casticin CAS 479-91-4 规格： 20mg 订购|咨询
(S)-N-去乙基盐酸奥昔布宁 (S)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride 181647-14-3 质量规格：美国进口
芦竹碱;Gramine CAS 87-52-5 规格： 20mg 订购|咨询
(S)-盐酸奥昔布宁 (S)-Oxybutynin hydrochloride 230949-16-3 质量规格：美国进口
辽东楤木皂苷Ⅶ;Araloside VI CAS 340982-22-1 规格： 20mg 订购|咨询
脱氟帕罗西汀盐酸盐 Defluoro Paroxetine, Hydrochloride 324024-00-2 质量规格：美国进口
苦蒿素;Blinin CAS 125675-09-4 规格： 20mg 订购|咨询
帕罗西汀马来酸盐 Paroxetine maleate 64006-44-6 质量规格：美国进口
甲氧醉椒素 ;Yangonin CAS 500-62-0 规格： 10mg 订购|咨询
实验要点 ：
1．可保种型蓝白 T 载体50ng说明书CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。非冻型组织RNA保存液 小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
储存事项:
A. 在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
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文献和实验了一下，小提了质粒，做了酶切。（Kpn I和EcoR I是我的引物上带的位点） 酶切鉴定完了之后，从6号和7号克隆菌液中各取了1 ml送测序。结果6号有两个位点突变，还少了一小段，7号正确，算是运气比较好吧。接下来的操作，论坛上已经有很多大佬说过了，到了这一步之后，可能后面遇到的主要问题就是连接。Takara的T4连接酶说明书上说，载体与目的片段分别是0.03 pmol和0.3 pmol，也就是1:10。我一般就是按照说明书做的，效果也还行。但是，我做的片段都比较短，可能大片段的话要调整比例
酶切位点； 直接克隆虽然省事，但是还不如先走T载体克隆，然后再连接到你的目的载体上了！ robustandy 首先，确定一下你的片断浓度，根据你这个片断大小应该不难连接。 注意片断纯化质量， 如果含有乙醇可能不好连接。 重要的是，你应该按照片断的摩尔比去优化，而不是片断的质量比。载体用50ng 应该就足够了，以这个量去计算你加入连接片断的量大概至少需要18.6ng。如果是单酶切的话，可能是载体去磷酸化不彻底，如果是双酶切可能是残余的未完全
体系 37度3小时 4ul pCDNA3.1载体（500 ng/ul） 1ul BamHI 1ul EcoRI 2ul 10×buffer 12 ul H2O 酶切完成后胶回收（见附录） 处理好的目的片段与载体连接反应体系： 6ul PCR 酶切回收片段（约50ng/ul） 1ul 酶切好的载体（约50ng/ul） 2ul ligase buffer 1ul T4ligase 10ul H2O 以上连接液在16℃过夜。 转化 (感受态细胞: DH5a),具体步骤见
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