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文献和实验从单个小鼠肿瘤样本中分选高纯度、高活性 TIL 细胞亚群的完整工作流程
TIL 细胞分选工作流程,解决实验瓶颈:即如何将小鼠肿瘤组织高效的分离成单细胞悬液、磁珠预富集 CD45+ TIL 细胞,然后从同一样品中依次分选高纯度和高活性的 TIL 细胞亚群。 分离高纯度、高活性的 TIL 细胞亚群的工作流程 1. 肿瘤分离 利用带有加热装置的八通道全自动组织解离器 gentleMACSTM Octo 和小鼠肿瘤分离试剂盒分离 1g 小鼠肿瘤组织。 2. CD45+ TIL 的免疫磁性预富集 为了提高目标 TIL 细胞的频率及纯度,从肿瘤分离出来的单细胞悬浮液中, TIL
Dynabeads Oligo(dT)25 及mRNA分离试剂盒 Dynabeads Oligo(dT)25是一种直径为2.8μm的均一、超顺磁的微球体,其表面的5连接键共价结合了由25个脱氧核糖核苷组成的长链。Dynabeads Oligo(dT)25是为从真核总RNA中或直接从动物组织、细胞和植物的粗提物中快速分离出高纯度、全长的polyA-RNA而设计的,可在15分钟内直接分离得到全长、纯的mRNA溶液,无需经过任何的纯化步骤。经Dynabeads Oligo(dT)25分离得到的mRNA溶于适宜的缓冲
Elution buffer洗脱mRNA,得到耦联在磁珠上的对照单链cDNA库。这时将样品(tester)的mRNA加入磁珠中,共同表达的基因对应的mRNA被磁珠上的cDNA吸附留在磁场中而特异表达的mRNA不被吸附随溶液流出柱外,这部分溶液反复过柱后得到的就是差异表达的mRNA。其它的mRNA分离试剂也可有类似的用法,只是本文介绍的方法由于得到的mRNA纯度高、完整且浓度高体积小,又是层析柱式的逐级淋洗使cDNA与mRNA吸附得更充分,所以假阳性较少。这种方法得到的是全长的mRNA,可以直接得到全长
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