转化储存液(2×TSS,pH6.5)

特别提示：包括转化储存液(2×TSS,pH6.5)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：转化储存液(2×TSS,pH6.5)
产品货号：GL1191
产品规格：100ml

用途：
DNA转化感受态细菌

注意事项：
无菌溶液，主要由PEG3350、氯化镁、DMSO、培养基等组成。

储存条件：4℃，12个月

除了转化储存液(2×TSS,pH6.5),，我公司还供应以下相关产品：



名称：单细胞裂解液(DNA提取)
货号：BTN130803
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN121004
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。本感受态细胞适用于真核蛋白表达，具有氯霉素抗性。

菌株基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)pRARE(argU，argW,ileX，glyT，leuW，proL)(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

名称：细胞松弛素B溶液
货号：BTN120686
规格：0.1mL
本产品为浓度为20mg/ml细胞松弛素B乙醇溶液。细胞松弛素(松胞菌素B；松孢素B；细胞分裂抑素B；Phomin)，分子式：C29H37NO5，分子量：479.61，CAS号：14930-96-2 。溶于乙醇，可溶于DMSO细胞松弛素B是从真菌类中分离得到的代谢产物。是以希腊语的cytos(细胞)和chalasis(松弛)组合而命名的。

结构式：


储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

名称：10×YTM Buffer(与NEB CutSmart Buffer成分相同)
货号：YT488
规格：5ml
百奥莱博的10× YTM Buffer是一种能让超过200种限制性内切酶的活性达到100%的缓冲液。使用YTM Buffer，可以免去内切酶酶切时选择buffer的麻烦，特别是在双酶切时会变得更加简单易行。此外，许多DNA修饰酶在YTM Buffer中也保留了100%酶活性，这样在酶切后进行DNA修饰酶处理就无需进行DNA纯化了。

各种内切酶和修饰酶在1× YTM buffer中的活性，请参考附录1和附录2。不同来源的限制性内切酶对于YTM Buffer的兼容性可能略有不同。1× YTM Buffer的组分为50 mM Potassium acetate, 20 mM Tris-acetate, 10 mM Magnesium acetate, 100 μg/ml BSA, pH 7.9 @ 25℃，与NEB公司的CutSmart™ Buffer完全一致。一个包装的本产品，如果用于20μl的酶切反应体系，共可以用于2500个酶切反应。

储存条件：-20℃。

附录1：
常用限制性内切酶在 YTM Buffer 中的活性和效能表如下：


附录2：
DNA 修饰酶在 YTM Buffer 中的活性表格如下:


名称：DH5α化学感受态细胞
货号：RFT166
规格：20×100μl
本公司生产的DH5α感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达10^8cfu/μg。
基因型：supE44△lacU169(j80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的 b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到zuì低。

储存条件：-70℃，有效期6个月。