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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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25
- 英文名：
一步法单菌落质粒 DNAout
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50 次
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
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9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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一步法单菌落质粒 DNAout50 次费用详细介绍：
操作步骤:
1. 一步法单菌落质粒 DNAout50 次费用匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
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一步法单菌落质粒 DNAout50 次费用FB2添加剂2ml*20支每套添加于HB4193中
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文献和实验大肠杆菌(Escherichia coli)是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌，它的遗传背景研究的比较详细，常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。 一. 实验目的 : 掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。 二. 实验原理 : 大肠杆菌除本身的核染色体外，往往还含有质粒(Plasmid)DNA，这是一种双链闭合环状
，能够生长的菌株就是成功转化的。说了这么多，我们怎么得到这么好的质粒呢？下面我想大家介绍一种最经典，也是最灵活的质粒提取步骤和每个步骤的原理。细菌的培养1. 从琼脂 LB 平板上挑取单菌落，接种到液体 LB 培养基中，过夜培养。Tips：菌体里的质粒一般含有抗生素抗性基因，在细菌培养过程中要向培养基中加入相对应的抗生素，以防质粒丢失。细菌的收获，裂解细菌的收获一般通过离心进行，而细菌的裂解有多种方式，包括离子型 / 非离子型去污剂，有机溶剂，或者碱裂解，加热等。选择哪一种方式主要看质粒的大小，大于
.Na2,（pH8.0）2. 细菌裂解液: 0.2 mol/L NaOH，1% SDS3. 中和液: 60 mL 5M 醋酸钾，11.5 mL 冰醋酸，28.5 mL 双蒸水4. 3 mol/L NaAc (pH 5.2)5. TE 饱和酚 (pH8.0)6. 氯仿/异戊醇 = 24:17. RNase（20 mg/mL）【实验方法与步骤】（一）质粒的小量制备:1. 将 5 mL LB 培养液 (含筛选抗生素) 加入到容量为 15 mL 并通气良好的试管中，然后将转化菌的一个单菌落接种于培养
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