克必隆零背景 T 载体20 次规格

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服务流程：
1）克必隆零背景 T 载体20 次规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. 克必隆零背景 T 载体20 次规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 克必隆零背景 T 载体20 次规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
BAY11-7082(NF-κB 抑制剂 )2mg  Cyanine 5-NHS Ester12x50nm
Brefeldin A( 蛋白转运抑制剂 )5mg  Cyanine 3-NHS Ester12x50nm
Camptothecin( 喜树碱 )100μL  Cy5-dCTP 溶液，10mM25μL
Canavanine，sulfate(iNOS 抑制剂 )100mg  Cy3-dCTP 溶液，10mM25μL
Carboxy-PTIO( 清除剂 )5mg  CTP 溶液，2.5mM2mL
磁珠法 mRNA 提取试剂盒25 次  柱式动物 RNAout50 次
Oligo(dT) 纤维素25mg  柱式动物 RNA-DNA 双提试剂盒50 次
Oligo(dT) 再生溶液100mL  柱式动物 DNAout50 次
链霉亲和素磁珠2mL  柱式凋亡 DNAout50 次
固相 RNase 清除剂100mL  柱式病毒 RNAout50 次
柱式酵母质粒 DNAout50 次  细菌 DNAout250 次
柱式 BAC DNAout 50 次  细胞松弛素 B 溶液 ,20mg/mL0.1mL
中提柱式 BAC DNAout5次  细胞核蛋白提取试剂盒50 次
柱式 Ti 质粒 DNAout 50 次  细胞表面蛋白分离试剂盒8次
大提柱式 Ti 质粒 DNAout5次  无脊椎动物种属鉴定 PCR Mix100 次
阿达青霉   顶头孢霉
长根菇（长根奥德磨）   黄色短杆菌
屎肠球菌冻干粉   浸麻类芽胞杆菌 Paenibacillus macerans
乙型溶血性链球菌   布鲁塞尔德克酵母 Dekkera bruxellensis
霍乱弧菌   丙丁醇梭菌 Clostridium acetobutylicum
大肠埃希氏菌   淡紫灰链霉菌
食油假单胞菌   阿达青霉
龟裂链霉菌   构巢曲霉
大肠埃希菌冻干粉   意大利青霉
冰核细菌   泡盛曲霉
克必隆零背景 T 载体20 次规格改良马丁培养基100ml   米黑根毛霉
沙门氏菌IV   苏云金芽胞杆菌东北亚种 Bacillus thuringiensis subsp. tohokuensis
恶臭假单胞菌   蚀脉镰孢霉
发光假蜜环菌   蛎灰链霉菌
粘红酵母   奇异变形杆菌
实验步骤：
(1) 克必隆零背景 T 载体20 次规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)