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玻片芯片
大鼠标记法抗体芯片(90芯片)
半定量检测90个指标
检测指标图谱:http://www.raybiotech.com/L_series_map.asp#3
一检查原理
标记法芯片是RayBiotech的L-系列芯片,L-系列芯片只需要一个捕获蛋白,它用生物素标记样品来代替标记检测抗体。这种模式可以检测那些没有合适的抗体对来建立ELISA检测的分析物。因为溶液中没有自由的检测抗体与其他抗体相互作用产生干扰试验,基于抗体相互作用产生的交叉反应就可以避免,所以引入新的抗体到标记芯片上比较容易,一个芯片上可以有几百个甚至几千个抗体。标记法芯片适合于大批量的筛选试验,且标记法芯片节省时间和操作步骤。
二、试剂盒内容
- 玻片芯片
- 标记试剂(1管)---Labeling Reagent
- 内参---Internal control
- 终止液----Stop Solution
- 封闭缓冲液---1X Blocking Buffer
- 500X 的HRP-链霉亲和素---1,000X HRP-Conjugated Streptavidin
- 20X的洗液I ---20X Wash Buffer I
- 20X 的洗液II---20X Wash Buffer II
- 2X 的细胞裂解液---2X Cell Lysis Buffer
- 检测缓冲液C---Detection Buffer C
- 检测缓冲液D---Detection Buffer D
- 透析柱---Spin Column
- 孵育板---Plate
三、结果扫描
RayBiotech 的芯片共有2种载体,一种是膜载体,一种是玻片载体。
1. 膜载体,就类似于Western Blot 实验采用的NC膜或PVDF膜,采用ECL化学发光作为显色信号,这种膜载体相对玻片载体使用时,需要等多一些样品用量,但凡是可以用于WB实验室的都可以使用RayBiotech的膜芯片,通用性高。
2. 玻片载体,是采用载玻片一样的玻璃片作为芯片载体,用Cy3或Cy5,绿色荧光信号作为显色信号,样品用量少,但需要与基因芯片通用的荧光扫描仪。
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文献和实验光报告分子,常用的荧光扫描仪都能够完成。第一代的蛋白芯片和DNA芯片一样是作为一种定性分析的工具,可用于分析样品之间相关蛋白的相对表达丰度;还可以作为DNA芯片的补充,用于研究蛋白和基因表达之间的关系。操作流程Ab Microarray 380抗体芯片并不要求特殊的实验操作,只要一般常规的操作就可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个操作流程包括:从50~200mg组织或细胞、体液中进行蛋白质抽提——用Cy5和Cy3两种不同颜色的荧光分子分别标记两个样品——洗去多余的标记分子——与芯片杂交孵育——扫描分析
Array上那8300个基因对应的80碱基长寡核苷酸序列是经过Clontech公司专利软件在GenBank中筛选出的同源性最低,又经Clontech实验确保能给出很强杂交信号的片断。这种精巧的设计保证很高的分辨率、灵敏度,实在令人印象深刻。现在,你可以通过基因公司定购这些寡核苷酸来制作自己的芯片了。足够点1000次芯片的8327个人类基因、5002个小鼠基因或者将近4000个大鼠基因的寡核苷酸片断(冻干)放在96孔板中,连同100个Type II玻片和杂交盒,200ml杂交液,全面满足中小型实验项目
是分辨率及灵敏度较低。根据生物芯片所使用的标记物不同,相应的信号检测方法有放射性同位素标记法、生物素标记法、荧光染料标记法等。其中放射性同位素由于会损害研究者身体,所以这种方法基本已被淘汰。而生物素标记样品分子则多用在尼龙膜作载体的生物芯片上,因为在尼龙膜上荧光标记信号的信噪比较低,用生物素标记可提高杂交信号的信噪比。目前使用最多的是荧光标记物,相应的检测方法也最多、最成熟,主要有激光共聚焦显微镜、CCD相机、激光扫描荧光显微镜及光纤传感器等。本文主要介绍激光共聚焦及CCD生物芯片扫描仪的弱信号
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