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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
一年
- 保存条件:
室温避光
- 规格:
500ml
Omni-ECL™Enhanced Pico Light Chemiluminescence Kit
本产品常温运输;室温避光保存,保质期12个月。
货号规格
goodSQ101L 100 mL
goodSQ101L 500 mL
产品内容
| 组分 | SQ101 | SQ101L |
| P-ECL A | 50 mL | 250 mL |
| P-ECL B | 50 mL | 250 mL |
产品特点
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产品简介
good增强型皮克级化学发光液是一种采用新型配方的辣根过氧化物酶(HRP)底物化学发光液,具有灵敏度极高、性能稳定、半衰期长、背景(本底)极低、重复性好等优点。它可以用于固相膜(如NC、PVDF)上结合的蛋白(Western Blot)或核酸(Southern/Northern Blot)的检测,既可感光X光胶片,也适用于荧光CCD相机的荧光扫描。
使用方法
good1. 转膜及抗体结合。采用常规方法进行转膜、封闭、一抗、HRP-二抗结合,直至二抗洗涤完毕;
good2. 等体积混匀 P-ECL A 和 P-ECL B ,配制化学发光工作液(每平方厘米的转印膜约需0.1 mL的工作液);
good3. 将化学发光液均匀滴到膜上,反应约3 min。如要检测的蛋白信号很高时,请尽量不要让化学发光工作液处于静止状态,可将加了工作液的膜置于摇床上混动约3 min,以避免局部的反应物过度消耗,影响检测信号的线性范围;
good4. 取出膜,沥去多余的发光工作液,将膜包裹于透明的保护夹中;
good5. X光片曝光:在暗室中将膜对X光片曝光。曝光时间从几秒到几分钟不等。将底片显影,如有必要,可根据显影结果调整曝光时间进行第二次曝光;
good5. CCD成像仪:无需将膜置于保护夹中,可直接用于拍照。拍照按仪器使用说明进行;
good6. 使用过的膜可剥离抗体后进行多次杂交。
注意事项
good1. P-ECL A及发光工作液应避免强光照射而导致灵敏度降低;
good2. 增强型皮克级化学发光液灵敏度很高,因此应避免由于使用的抗体浓度过高而造成背景升高现象;
good3. NaN3会抑制HRP的活性,因此二抗的保存或回收应避免使用NaN3;
good4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
good5. 本产品仅限科研使用。
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文献和实验底物 美国Pierce 皮克级 化学发光法 SuperSignalâ West Dura 持久性化学发光底物 美国Pierce
HRP,滴上DAB显色液,有条带的地方变棕色,没条带的地方不变色。 听起来挺直观的,但问题也很直观。 首先是灵敏度低。DAB显色法能检测到的蛋白量大概在纳克级别,而后续的化学发光技术能检测到皮克级别——差了三个数量级。也就是说,很多低丰度蛋白,DAB根本看不见。 其次是定量范围窄。棕色的深浅和蛋白量不是线性关系,颜色到一定程度就饱和了,你没法准确比较两条带的蛋白量差异。 再次是结果不可逆。DAB反应一旦发生,沉淀就固定在膜上了,你没法重复检测,也没法换方法复染。 所以DAB显色法很快就让位给了更
又如何呢?固定后的PAGE胶,蛋白不会迁移了,可是抗体和检测试剂能“渗透”进去的量就有限了。多谢化学发光法的高度灵敏,UnBlot的检测灵敏度是1ng,和经典的ECL化学发光法相当,不单适合压片显影,也适合CCD成像系统检测,绝对满足一般实验的检测要求。虽然从检测极限的数字上看起来好像不如那些动辄pico、Fremo的检测试剂盒那么高,但是要把在转膜过程中的蛋白损耗和被破坏的抗原决定簇算在内啊,可能也差不多了。UnBlot防止了这2种情况的发生并且帮助不易转膜的蛋白检测,这可是怎么也不能换算
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