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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量现货供应
- 英文名：
Fluo-3,AM
- CAS号：
121714-22-5
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100μL
Fluo-3 AM 的 DMSO 溶液是该探针最常用的储备液形式，通常浓度为 1-5 mM。由于 AM 酯类探针极易发生水解，对溶剂和储存条件有严格要求。
工作液配制与使用
- 稀释缓冲液：使用前，将储备液用适当的缓冲液（如含 0.02% BSA 的 HEPES 缓冲液或无血清培养基）稀释至工作浓度（一般为 2.5-20 μM）。
- 严禁含血清：稀释缓冲液中绝对不能含有血清，因为血清中的酯酶会提前水解探针，导致其无法穿透细胞膜。
- 助溶剂：由于 Fluo-3 AM 具有疏水性，可在水相缓冲液中加入非离子型去污剂（如 0.04% Pluronic F-127）以增加其水溶性和分散度。
细胞负载与检测参数
- 孵育条件：将细胞与 Fluo-3 AM 工作液在 20-37 °C 下避光孵育 15-60 分钟。孵育结束后需洗涤细胞，并可适当再孵育 20-30 分钟，以确保细胞内的 AM 酯被完全水解为具有荧光活性的 Fluo-3。
- 光谱参数：Fluo-3 结合钙离子后的最大激发波长为 506 nm，最大发射波长为 526 nm。实际检测时，推荐使用 488 nm 的激发光，并在 525-530 nm 处收集发射荧光。
储存条件
- 分装与密封：配制好的 DMSO 储备液应严格密封，并建议分装成小份（Aliquot），以避免反复冻融循环。
- 温度与避光：必须储存在 -20 °C 的低温环境中，并严格避光保存。
- 有效期：在严格密封、避光且 -20 °C 的条件下，通常可稳定保存 6 个月至 2 年。建议现用现配，或在使用前将保存液放置至室温后再打开瓶盖，防止冷凝水进入。
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文献和实验Fluo-3 AM 的 DMSO 溶液是该探针最常用的储备液形式，通常浓度为 1-5 mM。由于 AM 酯类探针极易发生水解，对溶剂和储存条件有严格要求。
(测细胞内游离钙离子浓度) 原理： AM酯的羧酸经修改不带电荷，易浸入细胞。一旦进入细胞，亲脂性集团被非特异酯酶切断，使其带电荷，从而溢出细胞大大减慢。一般，酯化集团水解对于结合靶离子是必须的。AM酯水解显颜色或荧光的特点可用于检查其自发水解。 保存： 指示剂干燥避光4℃或-20℃可长期保存。 AM酯易水解，发货瓶中至少可放六个月。 用时AM应溶解于无水DMSO，并尽快使用（一周内），否则细胞运载能力下降。AM的DMSO储备液应避光、冷冻、干燥保存。盐的储备液应用蒸馏
2+、Mg2+）洗2遍。加入Indo-1 AM（终浓度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。用PBS（含Ca22+、Mg2+）洗2遍。激光扫描共聚焦显微镜观察。 也可用弱的去垢剂Pluronic F-127助染。可将Pluronic F-127溶于DMSO配成20%（W/V）的溶液，终浓度1%～2%。 （四）Fluo-3测定细胞内Ca2+ 1. 储存液配制 Fluo-3（分子量为855），活细胞标记常选用Fluo-3 AM，分子量为1130，呈橙色粉状，避光冷藏保存或将其溶于
rongshenghao 加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度 问： 1.Fura-2和Fluo-3区别？ 2.测量的是游离钙还是总钙呀？ 3.还有什么需要注意的？ 谢了！ 2010tiger Fura-2采用双波长检测，Fluo-3是单波长检测，Fura-2的激发波长是340nm和380nm，发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm
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