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- 中国
- 2025年10月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量现货供应
- 英文名：
Fluo-4,AM（5mM无水DMSO溶液）
- CAS号：
273221-67-3
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
见说明书
- 规格：
20μL
CAS#：273221-67-3
中文名：钙荧光探针Fluo-4, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式：C51H50F2N2O23
分子量：1096.94
性质：
1. 外观：橙红色粉末
2. 纯度：≥90%（HPLC）
3. 产品描述：
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。
Fluo-4, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
4. 操作说明（for Human T cells）*
（1） 试剂
2 mM的Fluo-4, AM/DMSO（将1mg Fluo-4, AM溶于442µL DMSO）
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以 防止Fluo-4, AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
②. 用HBSS稀释Fluo-4, AM溶液，制备4µM的Fluo-4, AM工作液。
③. 将Fluo-4, AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。
④. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
⑤. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长494nm，发射波长516nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
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文献和实验(测细胞内游离钙离子浓度) 原理： AM酯的羧酸经修改不带电荷，易浸入细胞。一旦进入细胞，亲脂性集团被非特异酯酶切断，使其带电荷，从而溢出细胞大大减慢。一般，酯化集团水解对于结合靶离子是必须的。AM酯水解显颜色或荧光的特点可用于检查其自发水解。 保存： 指示剂干燥避光4℃或-20℃可长期保存。 AM酯易水解，发货瓶中至少可放六个月。 用时AM应溶解于无水DMSO，并尽快使用（一周内），否则细胞运载能力下降。AM的DMSO储备液应避光、冷冻、干燥保存。盐的储备液应用蒸馏
2+、Mg2+）洗2遍。加入Indo-1 AM（终浓度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。用PBS（含Ca22+、Mg2+）洗2遍。激光扫描共聚焦显微镜观察。 也可用弱的去垢剂Pluronic F-127助染。可将Pluronic F-127溶于DMSO配成20%（W/V）的溶液，终浓度1%～2%。 （四）Fluo-3测定细胞内Ca2+ 1. 储存液配制 Fluo-3（分子量为855），活细胞标记常选用Fluo-3 AM，分子量为1130，呈橙色粉状，避光冷藏保存或将其溶于
rongshenghao 加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度 问： 1.Fura-2和Fluo-3区别？ 2.测量的是游离钙还是总钙呀？ 3.还有什么需要注意的？ 谢了！ 2010tiger Fura-2采用双波长检测，Fluo-3是单波长检测，Fura-2的激发波长是340nm和380nm，发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm
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