BL21(AI) 感受态细胞100ul*10

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
BL21(AI) 感受态细胞100ul*10	100ul*10	表达感受态细胞

BL21(AI) 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
成骨细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)依诺沙星(水溶性）Enoxacin质量规格：依诺沙星含量≥60%
HCC-9204细胞，肝癌细胞 人细胞,HeLa细胞 人角膜上皮细胞cDNAHCEpiC cDNA氧氟沙星Ofloxacin质量规格：>98.5%,BR,可用于细胞培养
非洲绿猴肾细胞;BS-C-1氧氟沙星（标准品）Ofloxacin质量规格：HPLC>98%,标准品
CSF3R Others Human 人 CD114 / G-CSFR / GCSFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿巴卡韦  Abacavir质量规格：>99%,BR
正常大鼠肾细胞;NRK阿巴卡韦 (标准品)Abacavir质量规格：>98%,标准品
兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-1吡嗪(>98.0%(GC))Pyrazine质量规格：>98.0%(GC)
小鼠色素瘤细胞;B16-F1 小鼠关节软骨细胞完全培养基 100mL2,3-吡嗪二羧酸(>98.0%(HPLC)(T))2,3-Pyrazinedicarboxylic Acid质量规格：>98.0%(HPLC)(T)
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系 Rattus茴香偶酰(>98.0%(GC))p-Anisil质量规格：>98.0%(GC)
ACVR2A Others Human 人 ACVR2 / ACII / ACVR2A 人细胞裂解液 (阳性对照) 苯偶酰(>99.0%(GC))Benzil质量规格：>99.0%(GC)
人海马趾神经细胞HN-h苯偶酰 (区域精制法精制,熔段数:22)Benzil Zone Refined (number of passes:22)质量规格：
盐酸小檗碱,盐酸黄连素  Berberine hydrochloride  质量规格：≥97%(T)，BR 小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP-4/CCL13 ELISA Kit
盐酸小檗碱(标准品)  Berberine hydrochloride  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP5 ELISA Kit
京尼平苷酸  Geniposidic acid  质量规格：HPLC≥98% 小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP-5)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP-5 ELISA Kit
京尼平苷酸(标准品)  Geniposidic acid  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠单酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒 ，英文名： malonyl CoA ELISA Kit
原儿茶酸(标准品)  3,4-Dihydroxybenzoic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠单氧化酶A(MAOA)ELISA试剂盒 ，英文名： MAOA ELISA Kit
原儿茶醛,3,4-二羟基  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  质量规格：≥98% 小鼠胆(CH)ELISA试剂盒 ，英文名： CH ELISA Kit
原儿茶醛(标准品)  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠胆酯转移蛋白(CETP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
甲砜霉素甘氨酸酯盐酸盐  Thiamphenicol glycinate HCl  质量规格：>98%,BR 小鼠胆酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒Mousecholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 96T/48T
2.4-二羟基-6-甲基-烟酸乙酯  Ethyl 2,4-dihydroxy-6-methylnicotinate  质量规格：>98% 小鼠胆酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒 ，英文名： CETP ELISA Kit
恩拉霉素,持久杀菌素  Enduracidin  质量规格：BR,含量8%以上 小鼠胆碱0酸甘油酯(PC/CPG)ELISA试剂盒 ，英文名： PC/CPG ELISA Kit
BL21(AI) 感受态细胞100ul*10小鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA检测试剂盒Mousemonocytechemotacticprotein3,MCP-3 96T/48T 细胞色素C(马源)  Cytochrome C  质量规格：>95%,BR，来源马心
小鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP-3/CCL7 ELISA Kit 细胞色素C(牛源)  Cytochrome C  质量规格：>95%,BR，来源牛心
小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA检测试剂盒Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4 96T/48T 细胞色素C(猪源)  Cytochrome C  质量规格：>95%,BR，来源猪心
小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP-4/CCL13 ELISA Kit 盐酸小檗碱,盐酸黄连素  Berberine hydrochloride  质量规格：≥97%(T)，BR
小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP5)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP5 ELISA Kit 盐酸小檗碱(标准品)  Berberine hydrochloride  质量规格：HPLC≥98%,标准品
小鼠单核细胞趋化蛋白5(MCP-5)ELISA试剂盒 ，英文名： MCP-5 ELISA Kit 京尼平苷酸  Geniposidic acid  质量规格：HPLC≥98%
小鼠单酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒 ，英文名： malonyl CoA ELISA Kit 京尼平苷酸(标准品)  Geniposidic acid  质量规格：HPLC≥98%,标准品
小鼠单氧化酶A(MAOA)ELISA试剂盒 ，英文名： MAOA ELISA Kit 原儿茶酸(标准品)  3,4-Dihydroxybenzoic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠胆(CH)ELISA试剂盒 ，英文名： CH ELISA Kit 原儿茶醛,3,4-二羟基  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  质量规格：≥98%
小鼠胆酯转移蛋白(CETP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 原儿茶醛(标准品)  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  质量规格：HPLC≥98%，标准品
BL21(AI) 感受态细胞100ul*10操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。