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- 百奥莱博
- BTN130597-PJO
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
205
- 英文名：
Firefly Luciferase Assay Kit
- 保质期：
半年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃或-80℃
- 规格：
100次
特别提示：包括萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒
英文名称：Firefly Luciferase Assay Kit
产品货号：BTN130597
产品规格：100次
本试剂盒采用通用裂解缓冲液，能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。本产品与海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒共同使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。
报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。因为检测光量子的方法非常敏感，所以生物发光法是报告基因检测最常用的手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶催化的发光反应，具有很好的浓度线性范围(7~8个数量级的线性范围)，酶的检测灵敏度达到10?2omol。原理如下：
试剂盒特点：
1．高度灵敏：可检测10?1?～10?2omol荧光素酶。
2．线性范围宽：线性范围达到7~8个数量级。
3．快速简便：特别适合于高通量筛选。
4．兼容性好：与其它常用报告基因检测试剂兼容。
5．本产品可足够100次荧光素酶检测。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 5×Universal Lysis Buffer (通用裂解缓冲液) |
20mL |
| Fassay Buffer | 10mL |
| Fassay Substrate(底物) | 0.5mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃或-80℃避光保存，有效期半年。
使用方法：
★裂解细胞：
1. 配制裂解液：临用前，取适量5×Universal Lysis Buffer(ULB)，用双蒸水稀释至1×ULB，混匀。1×ULB可在4℃存放数周。
2. 清洗细胞：倾去培养板/皿中的培养液，加入足量PBS ，轻轻洗涤细胞。完全倾去洗涤液。
3. 裂解细胞：按照下表中推荐的体积，在孔/皿中加入1×ULB ，混匀。培养板可在微型振荡器上震荡5-10分钟；培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞，将细胞悬液移入1.5mL离心管，在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定，也可离心30秒，取上清液做发光测定。
表：不同孔/皿所需1×ULB体积
| 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 35mm平皿 | 60mm平皿 |
| 50μL | 80μL | 150μL | 250μL | 500μL | 500μL | 1000μL |
★配制发光反应液：
测定前，室温溶化Fassay Buffer和Fassay Substrate，混匀。按20/1比例用Fassay Buffer稀释Fassay Substrate，配制所需体积的Fassay Reagent(注意避光)。
★测定仪器的设置：
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器，将测读时间设为10~20秒。自动操作型仪器，一般将测定延迟设为2秒，将测读时间设为10~20秒，Fassay Reagent的注入体积设定为100μL。
★手动发光测定：
取待测样品20μl加入测量管底部，取Fassay Reagent 100μL立即加入管底部，轻轻敲击管壁3~5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。如用多孔板同时手动测定多个样品，则将各待测样品20μL分别加入连续的各孔底部，用多道加样器于各孔底加入Fassay Reagent 100μL，轻轻敲击板侧3~5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
★自动发光测定：
配制好的Fassay Reagent置于测定仪内并连接好对应管道。取待测样品20μL分别加入测定管/板孔底部，启动自动测量程序。记录Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
注意事项：
1．Fassay Substrate(底物)溶液应密封、盖严存放，避免蒸发。Fassay Buffer和Fassay Substrate(底物)应避免反复冻熔，可分装成合适体积分次使用。
2．1×细胞裂解液一般在当天测定。如需隔日测定，应将样品于-20℃保存。长期保存应在-80℃。
3．用多孔板同时手动测定多个样品时，要尽量缩短样品间试剂加入的时间间隔。
4．本产品与海肾荧光素酶活性检测试剂盒联合使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。
除了萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
ZN0024 ADAM15 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0062 AngiotensinⅡReceptor2/AGTR2 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0065 Annexin I mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0118 Bak mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0262 CD9 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0726 IL17A mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0745 Insulin mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0931 MT5-MMP mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN1069 P2RX7 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN1345 Synapsin I mRNA原位杂交试剂盒 100T
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文献和实验zhqmjeremy 各位战友好。有一个问题，未得其解，恳请帮助。 做荧光素酶报告基因的时候，检测的是细胞因子的启动子。换句话说，是细胞因子的启动子融合的报告基因被转染到细胞内，通过刺进因素作用后，检测启动子的表达情况。这个是背景。 问题是，怎么通过使用内参的方法，去除转染效率不同的孔和细胞之间的差别。 因为，个人认为，细胞数对报告基因的表达量影响比较大。 谢谢。 daidaiyidaidai
成线性关系，如下面式子所示： 因此，萤火虫检测法能被用于检测任何能够形成或降解 ATP 的酶或代谢物。典型的将萤火虫荧光素酶用于分子生物学领域是在关于 真核生物 DNA 的表达调节研究中被用作评价基因转染的报告基因 (2, 5) 。 在这个应用实例中，我们描述了荧光素酶检测的两个例子 PicaGene LT 2.0 和 LT 7.5 luciferase kits (Toyo Ink 制造 , Wako Pure Chemical Ind., Ltd. 销售 ) 。 使用辅酶
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc
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