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- 2025年08月22日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
His-LacZ大肠报告质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验1)诱饵―LexA融合蛋白的构建 (1)将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列，形成的质粒作为pBait。 (2)采用LexA融合基因和lexAop―lacZ报告质粒的组合，建立一系列EGY48lexAop―LEU2选择的转化酵母菌。 (3)将每种转化混合物铺在适宜的选择性缺陷板上，制备转化子的母板。 2)活化和抑制活性的鉴定(X
o）以及结构基因（lacZ、lacY、lacA）。转录受阻遏蛋白调控，如果加入 IPTG，阻遏蛋白失活，操纵子开始转录。 看到这里是不是很熟悉，你的基因转入质粒以后，是不是用 IPTG 诱导的？加入一定抗性，优化条件，是不是蛋白表达了？具体怎么会表达的，结合上述大肠杆菌的结构，有没有稍微懂一点呢？ IPTG 诱导表达系统 还不太明白，继续看下面这个图。 看懂了过程中，我们就好理解蓝白斑筛选了，细胞中 β-半乳糖苷酶
臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分
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