- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P2163
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
His-LacZ
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：His-LacZ大肠报告质粒
别称: His-LacZ
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | LacZ |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 启动子检测 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | LacZ |
质粒简介
His-LacZ质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1512/BY4742酿酒酵母菌 |
| P1513/ATCC9080酿酒酵母菌 |
| P4528/W303a(W303-1A)酿酒酵母菌 |
| P1514/EBY100酿酒酵母展示菌 |
| P1520/Y1HGold酵母单杂交菌 |
| P1515/Y187菌株双杂交菌 |
| P1516/Y2HGold酵母双杂交菌 |
| P1517/EGY48酵母双杂交菌 |
| P1518/NMY51酵母双杂交菌 |
| P1519/AH109酵母双杂交菌菌 |
| P1521/产朊假丝酵母菌 |
| P1524/A4发根农杆菌 |
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文献和实验1)诱饵―LexA融合蛋白的构建 (1)将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列，形成的质粒作为pBait。 (2)采用LexA融合基因和lexAop―lacZ报告质粒的组合，建立一系列EGY48lexAop―LEU2选择的转化酵母菌。 (3)将每种转化混合物铺在适宜的选择性缺陷板上，制备转化子的母板。 2)活化和抑制活性的鉴定(X
o）以及结构基因（lacZ、lacY、lacA）。转录受阻遏蛋白调控，如果加入 IPTG，阻遏蛋白失活，操纵子开始转录。 看到这里是不是很熟悉，你的基因转入质粒以后，是不是用 IPTG 诱导的？加入一定抗性，优化条件，是不是蛋白表达了？具体怎么会表达的，结合上述大肠杆菌的结构，有没有稍微懂一点呢？ IPTG 诱导表达系统 还不太明白，继续看下面这个图。 看懂了过程中，我们就好理解蓝白斑筛选了，细胞中 β-半乳糖苷酶
臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分
