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- 2025年08月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
PCMT-flp大肠敲除质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验和RecBCD蛋白组成，在基因敲除时必须以环状质粒存在）、结合转化敲除系统及温度敏感型质粒敲除系统等可供选择。 2 FLP-FRT系统和Cre-loxP系统 这两个系统都是位点特异性重组酶系统，其中FLP-FRT源于酿酒酵母，Cre-loxP源于F1噬菌体。两个系统的基本原理类似。以Cre-loxP系统为例，该系统含有两种成分：第一个部分是一段长34 bp的重组酶识别的DNA序列（loxP），其中含有两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的核心序列；第二个是Cre
min。注：平末端连接效率较低，在连接体系中添加 PEG4000 可以提高连接效率。在连接体系中添加 EcoRV 酶可以显著提高阳性率。四、 转化大肠杆菌感受态细胞及通过载体上的引物进行 PCR 鉴定阳性克隆挑选阳性克隆进行测序验证, 验证正确后, 提取质粒进行转染试验, 关于 sgRNA 是否有效。可以转染之后，直接提取 DNA，通过测序验证，如果在靶标位点附近开始出现杂乱的多峰说明是 sgRNA 有效，如果没有则该 sgRNA 无效。
同源重组的协助质粒，温度敏感复制子，高于 37℃该质粒会丢失，阿拉伯糖诱导后表Gam、Bet 和 Exo 三个λ噬菌体重组酶，氨苄青霉素抗性。 pCP20 基因敲除质粒 Amp，Chl http://cgsc.biology.yale.edu/Strain.php?ID=64645flp重组酶，又叫BT340载体，RED重组敲除系统，氨苄抗性和氯霉素抗性基因并为温度敏感型复制子，FLP 重组酶的表达粒
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