- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P2498
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#67274
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：PCMT-flp大肠敲除质粒
别称: Plasmid#67274
| 复制子: | pSC101 |
|---|---|
| 原核抗性: | Tet |
| 克隆菌株: | S17-1λpir |
| 培养条件: | 30度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Tet |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
请根据质粒名称查找相关文献获知具体的使用方法。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0869/pDsRed1-C1哺乳荧光质粒 |
| P0918/pmScarlet-C1哺乳荧光质粒 |
| P0652/pCAG-DsRed1哺乳荧光质粒 |
| P0715/pmGeos-M-C1哺乳荧光质粒 |
| P0716/pmGeos-M-N1哺乳荧光质粒 |
| P0958/pEF1α-tdTomato哺乳荧光质粒 |
| P1393/pHcRed1-C1哺乳荧光质粒 |
| P4856/pIRFP670-N1哺乳荧光质粒 |
| P1403/pmiRFP670-N1哺乳荧光质粒 |
| P1737/pCDNA3.1-mCherry哺乳荧光质粒 |
| P1772/Ai9哺乳荧光质粒 |
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文献和实验和RecBCD蛋白组成，在基因敲除时必须以环状质粒存在）、结合转化敲除系统及温度敏感型质粒敲除系统等可供选择。 2 FLP-FRT系统和Cre-loxP系统 这两个系统都是位点特异性重组酶系统，其中FLP-FRT源于酿酒酵母，Cre-loxP源于F1噬菌体。两个系统的基本原理类似。以Cre-loxP系统为例，该系统含有两种成分：第一个部分是一段长34 bp的重组酶识别的DNA序列（loxP），其中含有两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的核心序列；第二个是Cre
min。注：平末端连接效率较低，在连接体系中添加 PEG4000 可以提高连接效率。在连接体系中添加 EcoRV 酶可以显著提高阳性率。四、 转化大肠杆菌感受态细胞及通过载体上的引物进行 PCR 鉴定阳性克隆挑选阳性克隆进行测序验证, 验证正确后, 提取质粒进行转染试验, 关于 sgRNA 是否有效。可以转染之后，直接提取 DNA，通过测序验证，如果在靶标位点附近开始出现杂乱的多峰说明是 sgRNA 有效，如果没有则该 sgRNA 无效。
同源重组的协助质粒，温度敏感复制子，高于 37℃该质粒会丢失，阿拉伯糖诱导后表Gam、Bet 和 Exo 三个λ噬菌体重组酶，氨苄青霉素抗性。 pCP20 基因敲除质粒 Amp，Chl http://cgsc.biology.yale.edu/Strain.php?ID=64645flp重组酶，又叫BT340载体，RED重组敲除系统，氨苄抗性和氯霉素抗性基因并为温度敏感型复制子，FLP 重组酶的表达粒
