pMS2-GFP噬菌体基因质粒

诺奖得主 Jennifer 最新研究：CRISPR/Cas12c 无需切割 DNA 就可实现基因沉默，抵御病毒入侵

组中。 Cas12c 定向切割导致的染色体断裂对大肠杆菌是有毒的；相比之下，如果 Cas12c 结合但不切断靶 DNA，则会观察到基因靶向荧光团的损失而不导致细胞死亡。他们的实验结果表明，野生型 Cas12c 和 RuvC 失活的 dCas12c 在靶向 GFP 或 RFP 的 sgRNA 的引导下，可以沉默基因表达而不杀死细胞。因此，这些结果也与上述生化数据一致，即 Cas12c 是结合但不切割目标 DNA。 图片来源：Molecular Cell 天然 Cas12c 保护细胞免受噬菌体

质粒构建及提取概述

-GFP 等）以及其他应用的质粒。根据质粒的拷贝数不同，又可以分为高拷贝质粒（质粒可以在细胞内复制成几百个拷贝）和低拷贝质粒（质粒在细胞内只有＜20 个拷贝）。质粒的拷贝数通常受到复制子的调控。 质粒上通常会带有多种元件，例如，复制起始位点（ORI），抗性基因，多克隆位点，启动子，终止子，标签序列等等。质粒上至少要带有复制位点（ORI），否则无法进行复制；除了一些特殊质粒（如 minicircle plasmid）之外，绝大多数质粒都带有抗性基因，用于抗生素筛选。多克隆位点可以通过酶切，酶连或者同源

【求助】求可以用Sal酶切位点重新构建的质粒

lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！ fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因