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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pIRESneo
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: CMV
质粒分类: 哺乳细胞，蛋白过表达载体
质粒大小: 5.3kb
原核抗性: Amp 筛选标记: Neo
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无须诱导，瞬时表达
5'测序引物: CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pIRESneo (originally described as pCIN4 by Rees et al.; 1) contains the internal ribosome entry site (IRES) of the encephalomyocarditis virus (ECMV), which permits the translation of two open reading frames from one messenger RNA (2, 3). After selection with G418, nearly all surviving colonies will stably express the gene of interest, thus decreasing the need to screen large numbers of colonies to find functional clones. The expression cassette of pIRESneo contains the human cytomegalovirus (CMV) major immediate early promoter/enhancer followed by a multiple cloning site (MCS), a synthetic intron known to enhance the stability of the mRNA (4), the ECMV IRES followed by the neomycin phosphotransferase (NPT II) gene, and the polyadenylation signal of the bovine growth hormone. Ribosomes can enter the bicistronic mRNA either at the 5' end to translate the gene of interest or at the ECMV IRES to translate the antibiotic resistance marker.
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文献和实验1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
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