pCDNA3.1-BBS7-EGFP人源基因质粒

核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达

-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill

细胞转染实验

一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入

【求助】求可以用Sal酶切位点重新构建的质粒

切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀? pcDNA 3.1 就可以了。 最好是带有GFP标记的非病毒质粒， 有的pcDNA3.1有带GFP标记的。 还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？ 看你实验目的，一般来说，G418是耐药筛选转染后的细胞株，将没转染成功的细胞用G418杀死，但如果只是做基因治疗的话，基因的转染成果与否，感染细胞的效果可以用流式细胞或荧光显微镜看GFP的表达