pCDNA3.1-BBS7-EGFP人源基因质粒

基本信息
名称：pCDNA3.1-BBS7-EGFP人源基因质粒
别称: BBS2L1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8317 bp ds-DNA     circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8317
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        236..615
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        616..819
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        864..882
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      918..927
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             927..950
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     misc_feature    966..3110
                     /label=BBS7-WT
     CDS             3147..3866
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /label=EGFP
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_signal    3918..4142
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      4188..4616
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        4630..4959
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             5026..5820
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    5994..6115
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(6566..7151)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(7322..8182)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(8183..8287)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 cgacggatcg ggagatctcc cgatccccta tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat
       61 gccgcatagt taagccagta tctgctccct gcttgtgtgt tggaggtcgc tgagtagtgc
      121 gcgagcaaaa tttaagctac aacaaggcaa ggcttgaccg acaattgcat gaagaatctg
      181 cttagggtta ggcgttttgc gctgcttcgc gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat
      241 tgattattga ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat
      301 atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac
      361 ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc
      421 cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg
      481 tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat
      541 tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc
      601 atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt
      661 gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac
      721 caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc
      781 ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc tctggctaac tagagaaccc
      841 actgcttact ggcttatcga aattaatacg actcactata gggagaccca agctggctag
      901 cgtttaaact taagcttgcc accatggact acaaggacga tgacgacaag ggcgggggcg
      961 ggtctatgga tctgatttta aaccgaatgg attatctgca ggtgggagta acatctcaga
     1021 agactatgaa gctaattcct gcctcaagac acagagctac acaaaaggtg gttattggag
     1081 atcatgatgg ggtagttatg tgctttggca tgaagaaagg agaagcagca gcagtgttca
     1141 agactttacc cgggccgaag attgcaaggc tggaactggg aggggttatc aacacacctc
     1201 aggagaaaat ttttattgct gcagcatctg agattagagg cttcacaaaa agaggaaaac
     1261 agttcctctc ctttgaaaca aacctcactg aaagcattaa agctatgcac atatctggct
     1321 cagacctctt tctcagtgca agttacatct ataaccatta ttgtgactgc aaagaccaac
     1381 attattacct ttctggggat aaaatcaatg atgtgatctg ccttccagtg gaaagattat
     1441 ctcgtatcac acctgtattg gcctgccagg acagagtgct cagagtttta cagggatctg
     1501 atgtgatgta tgcagttgaa gttcctggac cccctactgt cttagcacta cacaatggaa
     1561 atggcggtga ctctggagaa gaccttttgt ttgggacatc agacggaaaa cttgcgctta
     1621 tacagattac tacatccaaa ccagtacgca agtgggaaat tcaaaatgag aaaaagagag
     1681 gaggtatttt gtgtattgac agctttgaca ttgtgggtga tggggttaaa gatttacttg
     1741 ttgggagaga tgacggaatg gtggaagtgt atagttttga taatgcaaat gaacctgttc
     1801 tacgatttga tcagatgttg tctgaaagcg tcacatctat ccagggtggt tgtgtaggaa
     1861 aagacagcta tgatgaaatc gtggtgtcca catattcagg ctgggttaca ggtctgacaa
     1921 cagagcccat tcataaggaa agtggaccag gagaagaact aaaaattaat caggagatgc
     1981 agaataaaat ttcttcctta cggaatgagt tggaacattt gcagtataag gtattgcagg
     2041 aaagagagaa ttatcaacag tcttctcaat caagcaaagc aaaatcagca gtaccttcct
     2101 ttggtataaa tgataaattt acactaaata aagatgatgc cagttacagc cttatcttag
     2161 aggtacagac tgcaatagat aatgtcttaa tacagagtga tgttccaata gatttacttg
     2221 atgtggataa aaattctgct gttgttagct ttagcagctg tgattctgag tcaaacgaca
     2281 acttccttct tgccacttat cggtgccagg cagatactac aaggctggaa ctcaagattc
     2341 gctcaattga aggccagtat ggcacactac aagcatatgt gactccaaga attcaaccca
     2401 aaacctgtca ggtccgccag taccacatca aacctctttc actccatcaa agaactcact
     2461 ttattgatca tgacagaccc atgaatacac tgaccctaac aggccagttc agttttgctg
     2521 aagttcactc ctgggtggtt ttttgtctgc ctgaagttcc agaaaaacct ccagcaggag
     2581 aatgtgtgac attttacttt cagaacacct ttctagatac acaacttgaa agtacctaca
     2641 gaaaaggaga gggagttttt aaatctgaca acatttctac tatctccatc ctaaaagatg
     2701 tgctttctaa agaagctaca aaaaggaaaa ttaacctcaa catatcatac gagataaatg
     2761 aagtatcagt caaacacact ttaaagctaa tccacccaaa gctggagtac cagttgcttt
     2821 tggctaagaa agtgcagtta attgatgctt taaaagaatt acagattcat gagggaaata
     2881 cgaactttct gataccagaa tatcactgta ttctagaaga ggcagatcac ctacaggaag
     2941 aatacaaaaa gcaacctgca catcttgaaa gactctatgg catgatcact gatcttttca
     3001 tagataaatt taagtttaaa ggcaccaatg taaaaactaa agtacccctt ctattggaaa
     3061 ttctggacag ttatgaccaa aatgcattga tttcattctt cgatgcagca ggcgggggcg
     3121 ggtctacgga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg
     3181 tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg
     3241 gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg
     3301 gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct
     3361 tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag
     3421 gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg
     3481 aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca
     3541 aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct
     3601 atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca
     3661 tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg
     3721 gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc
     3781 ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc
     3841 tcggcatgga cgagctgtac aagtaaagcg gccgctcgag tctagagggc ccgtttaaac
     3901 ccgctgatca gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc
     3961 cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga
     4021 aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga
     4081 cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat
     4141 ggcttctgag gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg tatccccacg cgccctgtag
     4201 cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag
     4261 cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt
     4321 tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca
     4381 cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata
     4441 gacggttttt cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca
     4501 aactggaaca acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc
     4561 gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattaatt
     4621 ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt
     4681 atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca
     4741 gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta
     4801 actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga
     4861 ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag
     4921 tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata
     4981 tccattttcg gatctgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat
     5041 ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca
     5101 caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg
     5161 gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg
     5221 cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact
     5281 gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct
     5341 caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg
     5401 cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt
     5461 actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc
     5521 gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc
     5581 gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga
     5641 ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc
     5701 cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt
     5761 atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga
     5821 gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt
     5881 tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg
     5941 gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt
     6001 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag
     6061 catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg
     6121 tctgtatacc gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg
     6181 tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta
     6241 aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
     6301 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
     6361 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
     6421 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
     6481 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
     6541 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
     6601 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
     6661 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
     6721 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
     6781 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
     6841 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
     6901 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
     6961 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
     7021 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
     7081 aacaaaccac cgctggtagc ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
     7141 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
     7201 actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt
     7261 taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca
     7321 gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca
     7381 tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc
     7441 ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa
     7501 accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc
     7561 agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca
     7621 acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat
     7681 tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag
     7741 cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac
     7801 tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt
     7861 ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt
     7921 gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc
     7981 tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat
     8041 ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca
     8101 gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga
     8161 cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg
     8221 gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg
     8281 ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2935/pCR4-TOPO-BTBD11人源基因质粒

P2936/pCR4-TOPO-TMSB4X人源基因质粒

P2937/pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒

P3075/pCR4-TOPO-C20orf96（2同义突变）人源基因质粒

P4826/pCR-BluntII-TOPO-CHRM3人源基因质粒

P4827/pCR4-TOPO-CHRM4人源基因质粒

P4828/pCR4-TOPO-DRD1（1同义突变）人源基因质粒

P3076/pCMV-SPORT6-SEMA4G人源基因质粒

P3077/pOTB7-PANK2人源基因质粒

P3028/pCMV-HDAC1人源基因质粒

P3056/pBluescriptR-ABCB4人源基因质粒