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- 2025年10月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCOLADuet-1
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: T7/Lac
复制子: ColA ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠杆菌载体；双表达框质粒
质粒大小: 3719bp
质粒标签: N-6×His,C-S
原核抗性: 卡那青霉素Kan
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: BL21(DE3)
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: ACYCDuetUP1：GGATCTCGACGCTCTCCCT DuetUP2:TTGTACACGGCCGCATAATC
3'测序引物: DuetDOWN1:GATTAGCGGCCGTGTACAA T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
备注: 同时表达两个外源蛋白
质粒简介
pCOLADuet-1 is designed for the coexpression of two target genes from a single plasmid. The vector encodes two multiple cloning sites (MCS) each of which is preceded by a T7 promoter, lac operator, and ribosome binding site (rbs). MCS-1 encodes the six-amino acid His•Tag sequence for the creation of a N-terminal fusion and MCS2 encodes the 15 amino acid S•Tag™ peptide after the last restriction site for the creation of a C-terminal fusion if desired. Genes inserted into MCS-1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer. Genes inserted into MCS-2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer. The vector has the COLA replicon from ColA(1) and the kanamycin resistance gene. This vector can be transformed into the same cell with plasmids containing compatible origins of replication and drug resistance genes for coexpression of up to 8 target genes.
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文献和实验1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
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