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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pENTR223-ACVR1B（1点突变）人源基因质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验-crRNA 和加长 pre-crRNA 融合构建了 crRNA-Cpf1 系统，在水稻中的编辑效率最高可达 41.2%;HU 等也将 LpCpf1 和 crRNA 整合开发了 CRISPR-Cpf1 系统，并利用该系统成功实现水稻内源基因的定点编辑;KIM 等开发了 Cpf1–RNP(ribonucleoprotein) 系统，并成功利用该系统对大豆和烟草的内源基因进行定点突变。此外，BEGEMANN 等将 Cpf1、crRNA 和供体片段构成融合表达载体，对水稻叶绿素 a 加氧酶基因 OsCAO
的上下游两端的序列连接起来，从而实现了目的基因的敲除。再如，可为细胞提供一个修复的模板质粒，这样细胞就可按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。也可对受精卵细胞进行基因编辑，并将其导入代孕母体中，可实现基因编辑动物模型的构建。
想给内源基因加上荧光标签、引入点突变，或者在特定位点插入报告基因，就需要 CRISPR 敲入（Knock-In, KI）： CRISPR KI 稳定细胞株怎么构建？为什么 KI 比 KO 难、周期更长？怎么验证敲入成功？ 先说结论： KI 的核心是"Cas9 切割 + 同源重组修复（HDR）"：用 sgRNA 引导 Cas9 在特定位点切割，同时提供带同源臂的修复模板（供体），把目的序列精确整合到基因组特定位点，再经单克隆分选和 PCR+测序验证，得到基因型明确的 KI 稳转株。与 KO
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