单链DNA/RNA环化连接酶

特别提示：包括单链DNA/RNA环化连接酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：单链DNA/RNA环化连接酶
英文名称：ssDNA/RNA CircLigase
产品货号：MT0056
产品规格：2000U|20000U

本制品为热稳定的单链DNA/RNA连接酶，不依赖于ATP，可催化单链DNA或单链RNA的环化，也可催化其分子间连接，但其对单链DNA的连接效率更高。环化反应中，要求催化底物单链DNA/RNA具有5’-磷酸基团和3’-OH基团。对于大于15nt的单链底物，该酶都能高效的连接。该酶还可催化DNA或RNA分子与预腺苷化的DNA接头之间的连接，另外，在ATP过量的情况下，该酶可使DNA/RNA分子腺苷化。

产品组成：

组分	2000U
ssDNA/RNA CircLigase(100U/μl)	20μl
10×CircLigase Buffer	250μl
50mM MnCl2	100μl

储存条件：-20℃可保存3年。

活性定义：60℃ 1h条件下，催化1pmol 5’-磷酸化参照Oligo（55mer)完全环化所需的酶量定义为1U。

注意事项：
1．1×CircLigase Buffer: 30mM Tris-acetate（pH 7.5), 60mM potassium acetate, 1mM DTT。
2．添加终浓度50μM的ATP可提高环化效率，高于1mM ATP浓度会抑制连接反应。
3．对于单链DNA产物的连接，需要加入终浓度2.5mM MnCl2。
4．5’端未磷酸化的底物不能用于连接，3’端无-OH的底物不能用于连接。
5．对于含有二级或复杂结构的连接底物，可加入0.4～0.8 M Betain以提高连接效率。
6．该酶对底物碱基具有选择性，5"末端连接效率: G>A>T(U)>C，3"末端连接效率T(U)>A>G，当3"端的碱基为C时不能用于连接，几乎无连接产物。

应用实例：

应用ssDNA/RNA环化连接酶环化52nt的单链DNA分子后PAGE凝胶电泳，泳道1为未加环化酶，2为加入环化酶，3为环化产物加入ExoI酶消化产物。

使用方法：

1．按以下组分配制反应液
  CircLigase（100U/μl)——————————1μl
  ssDNA/RNA————————————————10pmol
  10×CircLigase Buffer——————————2μl
  50 mM MnCl2———————————————1μl
  ddH2O——————————————————Up to 20μl
  60℃孵育1h进行环化反应，80℃ 10分钟失活该酶。

2．PAGE 胶检测
  反应产物于20%丙*酰胺/8M尿素变性凝胶电泳后，选择合适方法染色，观察环化或连接产物情况。未环化的底物或腺苷化的底物可用Exonuclease I酶进行消化。

使用注意事项：
1．ssRNA的连接不需要加入MnCl2。
2. 实验来看，加入20μM终浓度的ATP可提高连接效率约25%。
3. 加入0.4～0.8M Betain可提高含有二级结构的单链核酸连接效率。
4. 连接底物必须是磷酸化或腺苷化产物。

除了单链DNA/RNA环化连接酶,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
SV0027	AgeI限制性内切酶	1,500U|300U|150U
SV0266	BstXI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0294	CviAII限制性内切酶	1KU|200U
SV0598	PmlI限制性内切酶	10KU|2KU|1KU
SV0809	Nb.BbvCI切刻内切酶	5KU|1KU
SV0857	Q5 超保真 DNA 聚合酶	500U|100U|50U
SV1072	T5 核酸外切酶	5KU|1KU
SV1112	人类烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶 hAAG	2500U|500U
SV1124	Tma 核酸内切酶 III	2500U|500U
SV1572	糖原合成酶激酶 3（GSK-3）	50KU|10KU
MT0098	无机焦磷酸酶(酵母)	10U|100U