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- Lucigen（LGC）
- CL4115K
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- 2025年11月16日
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999
- 英文名：
CircLigase™ ssDNA Ligase 环化酶
- 保质期：
1年
- 供应商：
北京中北林格
- 保存条件：
-20℃
CircLigase™ ssDNA Ligase
应用
- 产生单链DNA模板用于滚环复制或者滚环转录实验。
- 产生单链DNA模板用于RNA聚合酶和RNA聚合酶抑制剂测定。
大于30个碱基的线性单链DNA，包括cDNA，均可被CircLigase II enzyme环化。标准反应条件下，不产生线性或环状的嵌合体结构。除了对单链DNA具有活性，CircLigase II也在具有3'-羟基核糖核苷酸和5'-磷酸化的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的单链核酸的连接中具有活性的活性。
活力单位定义: 一个活力单位的CircLigase II酶在标准反应条件下，60°C ，1小时能够将1 pmol的线性 5´-磷酸化的标准55-mer寡核苷转换成抵抗外切酶I的环状形式。 储存缓冲液: 50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和0.1% Triton® X-100。 10X反应缓冲液: 0.33 M Tris-乙酸盐(pH 7.5), 0.66 M醋酸钾和5 mM DTT。该反应缓冲液不含ATP和MnCl2, 需要额外添加, 终浓度为 0.05 mM ATP 和2.5 mM MnCl2。试剂盒提供2.5-mM ATP和50-mM MnCl2。 质量控制: CircLigase II ssDNA Ligase不含磷酸酶、DNA外切、内切和RNA酶活性。 Product Citations
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 Figure 1. CircLigase™ II ssDNA Ligase将线性单链DNA转换成环状单链DNA. A 71个碱基的单链DNA寡核苷在含有CircLigase™ II ssDNA Ligase和ATP的反应体系中被转换成环状DNA。Lane 1, DNA markers. Lane 2, 71个碱基的单链DNA. Lane 3, 环化经过腺甘酸化的中间体. Lane 4, 闭合环状的DNA通过专门切割线性DNA的外切核酸酶I进行验证。 |
CircLigase™ II ssDNA Ligase
应用
- 产生单链DNA模板用于滚环复制或者滚环转录实验。
- 产生单链DNA模板用于RNA聚合酶和RNA聚合酶抑制剂测定。
大于15个碱基的线性单链DNA，包括cDNA，均可被CircLigase II enzyme环化。标准反应条件下，不产生线性或环状的嵌合体结构。除了对单链DNA具有活性，CircLigase II也在具有3'-羟基核糖核苷酸和5'-磷酸化的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的单链核酸的连接中具有活性的活性。
CircLigase II具有更高的活性，配备了新的改进了连接效率的缓冲液。
活力单位定义: 一个活力单位的CircLigase II酶在标准反应条件下，60°C ，1小时能够将1 pmol的线性 5´-磷酸化的标准55-mer寡核苷转换成抵抗外切酶I的环状形式。 储存缓冲液: 50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和0.1% Triton® X-100. 10X反应缓冲液: 0.33 M Tris-乙酸盐(pH 7.5), 0.66 M醋酸钾和5 mM DTT。 质量控制: CircLigase II ssDNA Ligase不含磷酸酶、DNA外切、内切和RNA酶活性。 Product Citations
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Figure 1. CircLigase™ II ssDNA Ligase将线性单链DNA转换成环状单链DNA. A 71个碱基的单链DNA寡核苷在含有CircLigase™ II ssDNA Ligase和ATP的反应体系中被转换成环状DNA。Lane 1, DNA markers. Lane 2, 71个碱基的单链DNA. Lane 3, 环化经过腺甘酸化的中间体. Lane 4, 闭合环状的DNA通过专门切割线性DNA的外切核酸酶I进行验证。 |
| Catalog No. | Size |
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|
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| CircLigase™ II ssDNA Ligase | |
| CL9021K | 1,000 Units |
| CL9025K | 5,000 Units |
| Contents: CircLigase™ II ssDNA Ligase, CircLigase™ II 10X Reaction Buffer, 50 mM MnCl2, CircLigase™ ssDNA Control Oligo, Betaine, Sterile Water. | |
| Catalog No. | Size |
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| CircLigase™ ssDNA Ligase | |
| CL4111K | 1,000 Units |
| CL4115K | 5,000 Units |
| Contents: CircLigase™ ssDNA Ligase, CircLigase™ 10X Reaction Buffer, 1 mM ATP, 50 mM MnCl2, CircLigase™ ssDNA Control Oligo, Sterile Water. | |
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文献和实验DNA 两末端序列互补，但引物 3’ 端是相互反向的。 反向 PCR 的操作流程：扩增前先用限制性内切酶酶切样品 DNA，然后用 DNA 连接酶连接成一个环状分子，通过反向 PCR 扩增引物的上游片段和下游片段。 选择多种限制性内切酶，基本准则是选择不能在非酶切位点切断靶 DNA 的酶。裂解核心区的内切酶使反向 PCR 只能扩增引物所定模板(依赖于引物)的上游或下游区，而不裂解核心区的酶则使两侧序列都扩增，Southern 杂交来确定内切酶用以产生大小适于环化及反向 PCR 的片段的末端片段。大多
相关专题反向PCR(reverse PCR)反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物将含有两引物外未知序列，从而对未知序进行分析研究。反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA，也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA
因子ATP形成酶-AMP复合物。(2) 酶-AMP复合物结合到具有5’-磷酸基和3’-羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化。(3) 产生一个新的磷酸二酯键,把缺口封起来.但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶,因该酶在正常条件下,即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽,分子量为68,000道尔顿,它能催化双链DNA上相邻的3-羟基和5-磷酸末断形成磷酸二脂键。λDNA用EcoRI酶切割后形成的6个片断均具有粘性末端(Cohesive ends),在T4 DNA 连接酶作用下,可连接成原来
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