Super ECL Plus超敏发光液

Super ECL Plus超敏发光液比DAB显色灵敏度高千倍以上，比Amersham的ECL发光液灵敏度高百倍以上，比Pierce的SuperSignal West Pico Substrate灵敏度高1~5倍。在暗房内高丰度蛋白条带的荧光常常数小时内仍然肉眼可见，X线胶片曝光5～30s即可得到高清晰条带；低丰度蛋白条带荧光肉眼可能不易察觉，但曝光30s~5min即可检测条带；极低丰度的蛋白条带荧光可允许30min~12曝光以检测目的条带。Super ECL Plus超敏发光液衰减较慢，20min内荧光几无减弱，检测时产生的非特异背景非常低，也可节省抗体和待测样品的用量，该试剂可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)。

ECL化学发光检测试剂是基于Luminol的新一代增强型化学发光底物试剂，可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)催化发生化学反应而发出荧光，结果可以通过X光片压片和其他显影技术展现或使用Luminometer检测。

操作步骤（仅供参考）： 
1、 Western二抗孵育数次洗涤后，用镊子将膜轻轻取出，用吸水纸略吸去过多的液体(勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜或恰当容器上。
2、 配制ECL工作液： 根据需要量，取HRP Substrate Luminol Reagent和 HRP Substrate Peroxide Solution等体积混合即为ECL工作液，室温放置备用，工作液宜在临检测前配制。
3、 根据膜的大小，按每10平方厘米膜1mlECL工作液的比例，滴加ECL工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，放置1~3min。
4、 取膜，弃工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间(避免膜与膜之间产生气泡)，随后进行压片检测或荧光成像仪检测。
5、 在暗室内进行X-光胶片曝光，立即显影定影，根据结果再调整压片时间，或直接分别曝光0.5，1，3，5min，然后一起显影定影观察结果。 亦可采用荧光成像仪检测：将膜放置到荧光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。
 
注意事项： 
 HRP Substrate Luminol Reagent和 HRP Substrate Peroxide Solution在吸取过程中必须要更换枪头，上述试剂相互污染后会导致 HRP Substrate Luminol Reagent或 HRP Substrate Peroxide Solution逐渐失效，影响后续的使用效果。
为获得佳实验效果，应注意优化实验条件，包括实验检测样品的用量、一抗稀释度、二抗稀释度、杂交膜及封闭液的选择等。
当使用亲和素/生物素系统时，应避免使用含有脱脂奶粉的封闭液。
洗涤液、封闭液、抗体稀释液、ECL工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。
洗涤液、封闭液中避免使用叠氮钠，防止后者抑制HRP活性。
各溶液使用后，请盖紧瓶盖以防失效， 特别是HRP Substrate Peroxide Solution含有氧化剂，比较容易被还原而失效。
荧光持续时间很长，但开始反应后的30min内荧光更强一些，随后荧光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的30min进行曝光或成像仪检测。
HRP Substrate Luminol Reagent和 HRP Substrate Peroxide Solution均对人体有害，操作时请注意适当防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。