AMPPD发光显色试剂盒

AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。可使光信号输出更理想。AMPPD为1，2-二氧环已烷衍生物，它是一种生物化学领域中新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点：反应速度快，在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的分子结构中有两个重要部分，一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团，它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定。但是，结果有碱性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解（二氧四节环断裂），同时发射光子。AMPPD发光显色试剂盒适用于PVDF膜，不推荐用于硝酸纤维素膜。
 
自备材料：
1、转印了蛋白并已以抗体-酶复合物检测过的PVDF膜
2、Tris盐缓冲液(TBS)
3、透明的塑料保鲜膜
4、蒸馏水
 
操作步骤(仅供参考)：
临用前，取适量的A1和A2，等量混合后获得Dioxetane Buffer。
按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液)，用于膜的染色。
取适量Dioxetane Buffer洗膜两次，每次15min。
对于PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用5min。
将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer中，浸泡5min(AP反应)。
取出PVDF膜，滴干水分，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠将膜包裹起来，成为不漏水的封闭体。
在暗房中，将膜正面朝下放在感光胶片上，曝光数秒至数小时。
如需要，在室温下以适量的TBS洗膜15min。
将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，条带应在10~30min内出现。
10、用蒸馏水洗膜，终止反应。晾干后拍照留永久的记录。
 
注意事项：
1、 PVDF膜置于胶片上后，不要改变位置。
2、 曝光时间应根据实验情况，自行摸索。
3、 配制的AMPPD Dioxetane Buffer，应避光低温保存。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。