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上海研谨生物
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25T
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文献和实验方法也不同,常用的检测系统有化学发光检测(ECL)和化学显色 DAB 检测系统。 化学发光检测(ECL): 利用 HRP 催化化学发光物质,生成一种不稳定的中间物质,其衰变时在暗室内形成明显的肉眼可见的化学发光带,利用 X 胶片感光 原理,将结果记录下来。 ECL 显色试剂配制:化学发光底物 A 和 B 按照 1:1 比例等体积混匀。 将混合好的显色底物覆盖印迹膜 1-5 min,黑暗条件下观察荧光效果。 在暗室可用放射自显影胶片或化学发光成像系统记录结果 。 如采用放射自显影胶片,曝光几秒
o2)作用下鲁米诺发光,酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强度。此传统的化学发光体系(HRP-H2O2-LUMINOL)为几秒内瞬时闪光,存在发光强度低、不易测量等缺点。后来,在发光系统中加入增强发光剂,以增强发光信号,并在较长的时间内保持稳定,便于重复测量,从而提高分析灵敏度和准确性。 碱性磷酸酶(ALP)已广泛用于酶联免疫分析和核酸杂交分析。碱性磷酸酶和1,2.二氧环乙烷构成的发光体系是目前最重要、最灵敏的一类化学发光体系。这类体系中具有代表性的是ALP-AMPPD发光体系。在溶液中
一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1.HRP-ECL 发光法: 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗,滤纸贴角吸干,反贴法覆于 A、B 混合液滴上,熄灯至可见淡绿色荧光条带(5 min 左右)后滤纸贴角吸干,置于保鲜膜内固定于片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒,根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1~2 min,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定
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