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- 2026年04月23日
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circRNA 质粒/慢病毒/腺病毒产品
circRNA 质粒/慢病毒/腺病毒产品
circRNA 研究简述
有别于LncRNA、mRNA、miRNA 等这些线性的RNA，circRNA 以其闭环特征成功赢得了广大科研工作者的青睐，成为近来研究的热点。circRNA 由特殊的可变剪切产生，广泛存在于真核细胞内且表达有一定的组织、时序和疾病特异性。circRNA 研究较多的功能有两点：一是充当ceRNA 作为miRNA“海绵”，解除miRNA 对编码基因的翻译抑制；二是结合转录相关复合物调控亲本基因表达。
环状RNA的形成
1. circRNA 序列的获得
网站：http://www.circbase.org/，输入circRNA名称搜索（以hsa_circ_0032627为例），打开fasta（图1）。“circRNA sequence”选择“spliced”，下方选“search”即可得到成环序列；选择“genomic”，下方选择“Extend upstream by 1000 bases”，即可得到上游延伸1000bp的包含成环以及内含子的序列 （图2）
图1 hsa_circ_0032627 搜索结果
图2 序列查找界面
2. circRNA 过表达构建
目前文献多采用内源性的成环序列上游臂1kb，并生成这1kb的反向互补序列作为下游臂，将这两个臂构建至成环序列上下游并在成环序列两端加上AG-GT剪切序列。这种包含ALU序列及稳定二级结构的构建方式成环效率最高（图3）。
图3 circRNA 过表达载体构建方法
3. circRNA 干扰靶点设计
由于很多环状RNA 属于外显子成环，所以，如果针对成环序列设计，靶点同时会脱靶至本底基因。由此，靶点只能设计在成环接头处，一般一个环状RNA 只能设计1-2 条靶点。直接在接头处的40-45bp 设计靶点即可（图4）。
图4 circRNA 干扰靶点设计示例
吉凯circRNA产品体系
载体信息
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1. circRNA 序列的获得
网站：http://www.circbase.org/，输入circRNA名称搜索（以hsa_circ_0032627为例），打开fasta（图1）。“circRNA sequence”选择“spliced”，下方选“search”即可得到成环序列；选择“genomic”，下方选择“Extend upstream by 1000 bases”，即可得到上游延伸1000bp的包含成环以及内含子的序列 （图2）
图1 hsa_circ_0032627 搜索结果
图2 序列查找界面
2. circRNA 过表达构建
目前文献多采用内源性的成环序列上游臂1kb，并生成这1kb的反向互补序列作为下游臂，将这两个臂构建至成环序列上下游并在成环序列两端加上AG-GT剪切序列。这种包含ALU序列及稳定二级结构的构建方式成环效率最高（图3）。
图3 circRNA 过表达载体构建方法
3. circRNA 干扰靶点设计
由于很多环状RNA 属于外显子成环，所以，如果针对成环序列设计，靶点同时会脱靶至本底基因。由此，靶点只能设计在成环接头处，一般一个环状RNA 只能设计1-2 条靶点。直接在接头处的40-45bp 设计靶点即可（图4）。
图4 circRNA 干扰靶点设计示例
吉凯circRNA产品体系
| 操作工具 | 产品名称 | 简介 | 产品规格 | 周期(工作日) |
| 质粒 | 过表达质粒 | 用于过表达circRNA | 10ug（含等量对照） | 16 |
| RNAi-定制-shRNA质粒 | 用于下调circRNA，需提供靶点序列 | 10ug（含等量对照） | 15 | |
| 慢病毒 | 过表达慢病毒 | 用于过表达circRNA | 1E+8TU（含等量对照） | 20 |
| RNAi-定制-慢病毒 | 用于下调circRNA，需提供靶点序列 | 1E+8TU（含等量对照） | 20 | |
| 腺病毒 | 过表达腺病毒 | 用于过表达circRNA | 2E+10PFU（含等量对照） | 45 |
| RNAi-定制-腺病毒 | 用于下调circRNA，需提供靶点序列 | 2E+10PFU（含等量对照） | 45 |
载体信息
| 病毒载体 | 调控方式 | 载体编号 | 元件顺序 | 原核抗性 | 真核抗性 |
| 慢病毒 | 过表达 | GV502 | (polyA-MCS-UBI)RV-SV40-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin |
| GV367 | Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | ||
| GV409 | Ubi-MCS-CMV-EGFP | Ampicillin | |||
| GV358 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | ||
| GV208 | Ubi-MCS-EGFP | Ampicillin | |||
| 干扰 | GV493 | hU6-MCS-CBh-gcGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | |
| GV112 | hU6-MCS-CMV-Puromycin | Ampicillin | puromycin | ||
| GV248 | hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | puromycin | ||
| GV118 | U6-MCS-Ubi-EGFP | Ampicillin | |||
| GV115 | hU6-MCS-CMV-EGFP | Ampicillin | |||
| 腺病毒 | 过表达 | GV314 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP | Ampicillin | |
| GV315 | CMV-MCS-SV40-EGFP | Ampicillin | |||
| GV345 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry | Ampicillin | |||
| 干扰 | GV119 | hU6-MCS-CMV-EGFP | Ampicillin |
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文献和实验相关实验
课程内容： 1.miRNA Sponge 研究窘境 2.circRNA 研究的重要科学问题 3.新兴的 circRNA 研究思路：修饰，翻译，结合蛋白等等
环状RNA(circRNA)是一类特殊的非编码RNA分子,也是RNA领域的研究热点。circRNA分子呈封闭环状结构,不受RNA外切酶影响,表达更稳定,不易降解。circRNA分子富含microRNA(miRNA)结合位点,在细胞中充当miRNA分子海绵(miRNA sponge),可以解除miRNA对其靶基因的抑制作用。 在circRNA的研究中,设计出特异的circRNA引物极为关键。以下简介在circRNA的研究中,如何准确快速获得感兴趣circRNA序列并设计对应的环状RNA引物
circRNA 的数据库还是很多的，以下几个可供参考：1. circBase网站链接：http://www.circbase.orgcircBase 收集包括以下 6 个物种的 circRNA 信息：人 (hg19)、小鼠 (mm9) 、秀丽线虫 (ce6)、黑腹果蝇 (dm3)、矛尾鱼 (latCha1)、腔棘鱼 (latCha1)。该数据库是目前相对收录信息比较全和完整的，数据也能下载，非常实用。2. Circ2Traits网站链接：http://gyanxet-beta.com
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