F-DH5α化学感受态细胞

特别提示：包括F-DH5α化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：F-DH5α化学感受态细胞
英文名称：F-DH5α Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0023
产品规格：20×100μl/100×100μl

DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作.pUC19质粒检测转化效率可达1~5×10 8cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1gyrA96 relA1 phoA
快速转化操作方法(10min)：
(一)提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
(二)F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
(三)用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
(四)将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)：
一、F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
二、42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700 μl不含抗生素的LB，37℃，200 rpm复苏10分钟，涂板(均匀，表面无水渍)。
三、将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意事项：
(一)F-DH5α快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置20分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB，37℃，200 rpm复苏30分钟，涂板。
(二)感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。
(三)F-DH5α快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操作，增加孵育步骤。

除了F-DH5α化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：大肠杆菌Tuner(DE)plysS感受态细胞
货号：BTN130564
规格：0.1mL*10
 Tuner(DE3)plysS是的Tuner(DE3)衍生菌株，为高度严紧表达宿主菌，用于毒性蛋白表达，lac 透性酶突变，可以精细控制表达水平。抗性为氯霉素(34μg/ml)。

基因型：F–ompT hsdSB(rB– mB–)gal dcm lacY1(DE3)plysS(CmR)

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期6个月。

名称：衣霉素溶液
货号：BTN120702
规格：1mL
本产品为5mg/mL的衣霉素溶液，溶剂为*醇。衣霉素(链病毒菌素；Nsc177382；Aids010655)，分子式：C37H60N4O16，分子量：816.89，CAS号：11089-65-9 。为放线菌Streptomyces lysosuperficus产生的核苷酸抗生素。可抑制具有被膜(envelope，含糖蛋白)的病毒的繁殖。作用机理是抑制合成糖蛋白糖链必需的拟脂(多萜醇，dolichol)中间产物的生成。常作为研究糖蛋白的工具，能通过抑制N-乙酰氨基葡萄糖-1-磷酸到一磷酸长醇的转移从而阻止糖蛋白的形成。

储存条件：低温运输，4℃避光保存，有效期6个月。

名称：N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)
货号：YT476
规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
EGFP	677-1393
Multiple cloning site	1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site	1503-1524
SV40 polyA signal	1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication	2057-2363
bla promoter	2388-2512
SV40 promoter	2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF	205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3697-4155
pUC origin	4284-4951

本质粒(5003bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。