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- YBscience
- YB01260
- 进口/国产
- 2025年12月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
AD494(DE3)大肠杆菌菌株
- 保质期：
1-2年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1管
| 产品货号 |
产品名称 |
| YB01260 | AD494(DE3)大肠杆菌菌株 |
产品信息：
名称：AD494(DE3)大肠杆菌菌株
规格：300ul甘油菌
储存温度：-80℃
基因组：
D (ara-leu)7967, lacX74, phoAPvuII, phoR, malF3, trxB::Kan
产品简介：
AD494菌株来源于K12菌，AD494菌株含有thioredoxin reductase (TrxB)基因突变，有利于细菌胞内的二硫键形成，能够帮助蛋白形成正确的三维折叠，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase (TrxB)突变具有卡那霉素抗性，因此该宿主菌只能用于氨苄或者其他非卡那霉素抗性的质粒，进行基因蛋白表达。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；
5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；
6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2 促进生长；
7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。
8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。
保藏条件：
-20℃保存（复溶液于2-8℃保存）
保藏时间：
2-10 年，应根据菌种状况及时转接
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文献和实验大肠杆菌常用菌株（Commonly used strains）
. BL21(DE3) F– ompT gal dcm lon hsdSB (rB - mB - ) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]) an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA
are less susceptible to lysis during induction（只有NEB公司对T7 lysozyme 进行了这种突变，大大降低了lysozyme的毒性，细胞与BL21（DE3）plysS 相比能长到更高的密度） Maintenance of lysozyme plasmid does not require antibiotic selection（miniF质粒是单拷贝的，非常稳定，所以携带此质粒的菌株比BL21（DE3）plysS/plysE系列的菌株在操作，处理方面要简单很多
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
高特异活性标记。 BLR 为 recA - 衍生菌株，改善了质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列的目标质粒。两个硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株 (AD494,BL21 trxB ) ，有利于大肠杆菌胞浆中二硫键形成。 Origami TM 和 OrigamiB 菌株为 trxB/gor 双突变，这两个酶是主要还原途径的关键酶。 Origami 和 OrigamiB 宿主菌的主要优点是能形成正确折迭的含有二硫键的蛋白。新的 Rosetta TM 菌株补充了四种大肠杆菌稀有密码子的 tRNA
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