细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

产品货号：DA0041

产品规格：100T

自备材料：

低速离心机

1.5ml离心管

载玻片、盖玻片

荧光显微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)玻片法

收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清。

加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/ml。

取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×)。

取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl的MDC Stain(10×)，轻轻混匀。

37℃或室温避光染色15～45min。

800～1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细胞2次，800～1000g离心5min，弃上清。

加入100μl的Wash buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

(二)96孔板法

1、 配制MDC染色工作液：按MDC Stain(500×)：Stain buffer=1：499的比例混合，即为MDC染色工作液。如不能及时用完，应-20℃避光保存。

2、 轻轻吸除96孔板中的培养液，加入100μl MDC染色工作液至各孔，37℃ 5%CO₂避光孵育15～60min。

3、 各孔加入100μl Wash buffer清洗2～3次。

4、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

(三)MDC与EB双染法

1、 收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清。

2、 加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/ml。

3、 取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×)

4、 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl的MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液，轻轻混匀。

5、 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。

6、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：

正常细胞	细胞被均匀染成黄绿色荧光
凋亡细胞	染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒

注意事项：

MDC Stain和EB对人体有害处，请小心操作。

AO常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，可靶向长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体途径进行降解。自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm。Leagene细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

产品组成：

编号 名称	DA0041 100T	Storage
试剂(A): MDC Stain(500×)	30μl	-20℃ 避光
试剂(B): Stain buffer	50ml	4℃
试剂(C): Wash buffer	250ml	4℃
使用说明书	1份