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4℃
- 英文名:
in vivo-jetPEI
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大量
- 供应商:
上海伟进生物科技有限公司
- 规格:
0.1 ml reagent + 10 ml 10% glucose solution
订购信息
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0.1ml的in vivo-jetPEI®足以与50 µg 的DNA进行20次的小鼠静脉注射。用提供的葡萄糖溶液形成复合物,产生适于体内注射的纳米粒子。若您需要大包装或GMP级产品,请联系我们。 |
in vivo-jetPEI®是进行活体注射,转染各种核酸例如DNA、siRNA和寡核苷酸,从而在各种组织中介导基因表达的理想试剂。如活体成像(图1)所示。in vivo-jetPEI®具备多种功能,所以可以用于不同类型的核酸,例如siRNA、shRNA质粒、miRNA、寡核苷酸 ,如产品引用在线数据库所示。
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图1. 用in vivo-jetPEI®转染pCMVLuc质粒,经系统注射,进行荧光素酶的表达。基因转染24小时后,使用IVIS 100相机(Caliper-PerkinElmer)拍摄裸鼠活体内荧光素酶表达的生物发光成像。 in vivo-jetPEI® 与pCMVLuc (50 µg) 混合在400 µl 的5% 葡萄糖溶液中,然后进行尾静脉注射。 |
核酸治疗是否成功取决于能否高效的将治疗材料转进靶向组织或细胞,而且必须毒性低、免疫反应低。
因此,为了研究in vivo-jetPEI®在动物体内转染质粒 DNA和siRNA的潜在能力,我们首先静脉注射了一种表达荧光素酶基因的质粒,结果在肺中荧光素酶的表达最高。(图2)。
第二个实验,与荧光素酶序列匹配的siRNA构建到质粒上,该质粒与in vivo-jetPEI®混合,进行静脉注射(图2)。使用scramble siRNA作为阴性对照(图2)。静脉注射针对荧光素酶的siRNA比阴性对照的平均沉默效率高90%。因此,在动物模型中,通过vivo-jetPEI®介导的siRNA。
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图2. 使用in vivo-jetPEI®进行肺部RNA干扰。用对照siRNA(上)或10 µg特异性的anti-Luc siRNA(下)与pCMVLuc (40 µg)进行共转染。 将复合物注射入裸鼠的尾静脉。使用制冷CCD相机,通过生物发光成像监测转染24小时后的小鼠活体内荧光素酶基因表达。 |
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在多种动物种属的多种给药途径
in vivo-jetPEI®与核酸的复合物非常稳定,因此可以使用多种给药途径,如图4所示。根据给药途径,在大脑、肝脏、胰腺、脾脏、肾脏、心脏、膀胱、皮肤、视网膜、动脉等器官中也可以观察到in vivo-jetPEI®介导的基因表达。有关详细参考资料,请访问产品引文在线数据库。
注射途径和靶器官
经静脉注射,in vivo-jetPEI®介导的DNA转染在肺(图1和图2)、肝脏、胰腺、脾脏、肾脏、心脏、膀胱和动脉中进行基因表达。此外,in vivo-jetPEI®也适用于局部转染,例如皮肤涂抹,瘤内、脑内或关节内注射(见图4)。有关使用in vivo-jetPEI®的实验条件,请参见:
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图4. 使用in vivo-jetPEI®在小鼠体内成功转染的途径。 |
动物模型:
in vivo-jetPEI®已成功用于将核酸转染至多种动物种属,包括小鼠、大鼠、豚鼠、鸭子、兔子、猴、山羊、绵羊、鸡、鹌鹑、仓鼠、奶牛、蝌蚪、虾和鱼。结果证明,建立的实验方案适用于多种种属。我们的技术支持团队将很高兴根据您的动物模型帮助您优化步骤(请与我们联系)。
简便的操作步骤
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图9:in vivo-jetPEI®的操作步骤简便,在5%的葡萄糖溶液中混合核酸和转染试剂,然后将复合物注入动物体内。该操作步骤快速并且其适用于多种给药途径。 |
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文献和实验对于试验成功与否至关重要。最关键的是,应使用专门配制、输送小分子 RNA 的转染试剂(大部分市售的转染试剂设计用于大型质粒 DNA,而不是小 RNA 分子)。此外,仅有部分试剂设计用于特定细胞系的转染,而多数试剂的特异性范围较广。Lipofectamine RNAiMAX 是专为将 siRNAs 高效转染真核细胞而设计的转染试剂。 8.使用一个适当的阳性对照来优化转染和检测条件 对于大部分细胞,管家基因适合作为阳性对照。向靶标细胞转染几个浓度的、对您所选择的阳性对照特异的 siRNA。(这也适用
用它的Silencer siRNA Cocktail Kit(RNase III)试剂盒成功关闭几个基因,包括c-fos, GAPDH, La, ?-actin, 和Ku-70。最适用于:快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型不适用于:长时间的研究项目,或者是需要一个特定的siRNA进行研究,特别是基因治疗体内表达前面的3种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到siRNAs
一般情况下,瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中,过表达用的是 mimics,敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达(gain and loss 实验),观察下游
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