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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
57
- 英文名:
Fast Genotyping PCR Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
20μl×500次
特别提示:包括超敏快速基因组PCR扩增检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:超敏快速基因组PCR扩增检测试剂盒
英文名称:Fast Genotyping PCR Kit
产品货号:JN0044
产品规格:20μl×500次
本试剂盒专门为基因组及微量DNA PCR扩增检测设计优化,可从少量基因组模板中高效扩增出0.2kb~4kb的目的条带,其灵敏度为普通PCR反应的100~10,000倍。适用于基因组PCR扩增、微量模板、复杂模板等的扩增和大规模基因检测。
针对普通Genotyping PCR循环数目多(40次循环),反应时间较长缺陷,超敏基因组PCR扩增检测试剂盒(快速型)采用Fast Taq DNA 聚合酶,该酶是利用分子进化技术在普通Taq酶基础上改造、制备的新 型Fast Taq DNA聚合酶,其扩增速度大幅提高,至少为普通Taq酶的4 倍,因此大大缩短了基因组PCR扩增检测所需的时间。
本试剂盒包括2×反应缓冲体系和酶2个组分,2×Reaction Mix包含了genotyping PCR所需的全部试剂、dNTP及PCR增强剂。本产品使用方便快捷,使用时只需在2×Reaction Mix加入引物、模板及酶并加入去离子水稀释至1×即可进行反应。2×Reaction Mix提供普通型/快速上样型两种形式供您选择,经测试,染料的加入不影响扩增性能。2×Reaction Mix中预混蓝色染料的,在配制反应体系时,可很方便地检测各组分混匀情况,在PCR反应完成后可直接电泳,节省时间。
本试剂盒不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测和微量DNA的 检测。复杂模板(如含二级结构,GC rich,和重复序列等)的扩增:(如构建基因图谱、测序及分子遗传学研究等)。PCR产物如需克隆,纯化后可直接进行T/A载体克隆。
本试剂盒适用于从复杂背景中扩增微量模板DNA。由于Genotyping PCR的突变率 高于普通PCR反应,故其产物不推荐用于需高保真的基因克隆。 Genotyping PCR所用引物需精心设计,否则会扩增出较多杂带,(参见PCR引物设计的黄金法则)。
超敏基因组PCR扩增检测反应体系:
| 组分 | 体积 |
| 2×Reaction Mix* | 10μl |
| 上游引物 | 0.05uM(终浓度) |
| 下游引物 | 0.05uM(终浓度) |
| dNTP(各10mM) | 1.0μl |
| 模板 | 1-100ng基因组DNA |
| FastTaq酶(5U/μl) | 0.25μl(1.25U) |
| ddH2O | 至20μl |
| *反应体系可成比例调整至50μl等体积 | |
超敏基因组PCR扩增检测PCR程序:
| 当扩增片段<3K: | |
| 93℃ | 1分钟30秒 |
| 30次循环 | 93℃,30秒 57℃,30秒(57℃适用于大多数反应,亦可在55-60℃调整) 65℃,按产物长度15秒/1KB计算 |
| 4℃ | 保温 |
我公司销售的超敏快速基因组PCR扩增检测试剂盒质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验技术、TALEN技术和CRISPR/Cas9技术的基因敲除研究。 实验流程1. 基因组DNA的准备:提取野生型和突变型细胞的基因组DNA。Genloci公司专为阳性克隆筛选设计的TNA抽提试剂盒也能帮您的忙,只需500个左右的细胞即可提取全基因组DNA。 2. 杂交DNA的准备:a) PCR引物设计:一般扩增产物长度为300~600 bpb) PCR扩增:获得杂交DNA 3. Cruiser™酶筛选阳性克隆:无需纯化DNA,直接使用PCR产物,混合体系后45℃下反应15~20 min K562
技术、TALEN技术和CRISPR/Cas9技术的基因敲除研究。实验流程1. 基因组DNA的准备:提取野生型和突变型细胞的基因组DNA。Genloci公司专为阳性克隆筛选设计的TNA抽提试剂盒也能帮您的忙,只需500个左右的细胞即可提取全基因组DNA。2. 杂交DNA的准备:a) PCR引物设计:一般扩增产物长度为300~600 bp b) PCR扩增:获得杂交DNA3. CruiserTM酶筛选阳性克隆:无需纯化DNA,直接使用PCR产物,混合体系后45℃下反应15~20 minK562细胞
甲基化水平。它由Kuo等1980年[18]首次报道。过程是将DNA样品先经盐酸或氢氟酸水解成碱基,水解产物通过色谱柱,结果与标准品比较,用紫外光测定吸收峰值及其量,计算5mC/(5mC+5C)的积分面积就得到基因组整体的甲基化水平。这是一种检测DNA甲基化的标准方法。但它需要较精密的仪器。Fraga等2002年[19]运用高效毛细管电泳法(HPCE)处理DNA水解产物,以确定5mC的水平。与HPLC相比,HPCE更加简便、快速、经济。HPLC及HPCE测定基因组整体DNA甲基化水平的敏感性均较高
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