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- 2025年12月31日
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研载生物
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细胞成脂或成骨诱导
一、技术简介
干细胞和祖细胞群体存在于多种成体组织中，包括皮肤、肌肉、骨髓和脂肪。越来越多的研究表明这些细胞可能具有多系分化的潜能，能够生成除来源组织以外的细胞类型。近年来，人们发现成体脂肪组织可作为间充质干细胞另外一个丰富的来源。这残细胞被命名为脂肪来源的干细胞（ASCs)。在特定的培养条件下，ASCs可诱导分化为多种间充质和神经类型细胞。
二、实验流程
成骨诱导培养液配备与诱导操作
1. 准备含10%FBS的α-MEM培养液。
2. 在备好的α-MEM培养液中添加50μM抗坏血酸，10mM β-磷酸甘油和100nM地塞米松。
3. 准备6孔培养板，将细胞接种于原始α-MEM培养液。
4. 每三天换液一次，细胞长至7天时进行碱性磷酸酶染色。
5. 28天后再进行矿化结节的茜素红染色。
成脂诱导培养液配备与诱导操作
1. 配置PBS10%含量的HG-DMEM培养液。
2. 在配置完成的HG-MEM培养液中加入10μM地塞米松、10μg/ml胰岛素、200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX。
3. 准备6孔培养板，将细胞接种于原始HG-MEM培养液中。
4. 待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成脂诱导培养液培养2天，在用只含有10μg/ml胰岛素的成脂维持培养液培养1天，如初交换培养至14天，使用红油O染色。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：细胞种类、需要诱导分化细胞类型。
2. 公司提供：成功诱导分化的细胞，实验报告。
3. 实验周期：25-40个工作日。
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文献和实验（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x103个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。（3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。（4）每三天换液，诱导2-3周。（5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色。二、成脂诱导体系：1. 试剂成脂诱导液A：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素，IBMX，地塞米松，吲哚美锌。成脂诱导液B：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛
本文来自Cyagen赛业：http://www.cyagen.com.cn 碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】
碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2%
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