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- 提供商:
研载生物
- 服务名称:
外泌体电镜检测
- 规格:
样
一、技术简介
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200 nm,形态也呈现出多样性,有研究分为9个类别依次为:单囊泡、双囊泡、 多膜泡、小双层膜泡、椭圆膜泡、小管、大管、不完整的膜泡、不规则膜泡,其中在不同类别的囊泡中可以发现三个附加特征:表面具涂层的膜泡、内含纤维的膜泡、电子致密囊泡。
本司采取通过透射电镜确定外泌体大小。
二、实验流程
1. 将外泌体用戊2醛固定。
2. 将5-10μl外泌体溶液滴加到铜网上,室温吸附10min左右,用滤纸小心吸去多余的液体。然后向铜网上滴加10μl 2%的磷钨酸溶液(pH=6.5),在室温下对外泌体染色处理2min,小心用滤纸吸去多余的染色液,将铜网在室温下晾干。
3. 上机检测。
4. 提供实验报告。
三、服务说明及结果
1. 客户提供:外泌体(30 μl)或由我司分离得到外泌体。
2. 公司提供:基本实验步骤、图片、数据分析结果。
3. 实验周期:15个工作日。
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文献和实验保存。 13、如何鉴定提取的外泌体? 通常会用到:透射电镜检测(形态)、NTA 粒径检测(大小)、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时,常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解? 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂,或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
上还是在内含物中都具有很大的差异性,这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。 图一 外泌体透射电镜图和 NTA 图 一、肿瘤细胞来源外泌体功能解析: 海军军医大学王红阳课题组在《Nature Communications》上发表文章[1],揭示了肝癌细胞分泌的外泌体可促进正常成纤维细胞向癌症相关成纤维细胞(CAFs)转化,其中起重要作用的是外泌体中的 miR-1247-3p。CAFs 能分泌促炎因子,并促进肝癌的发展和向肺部的转移。 图二 肝癌细胞分泌的外泌体增加
? 外泌体分离之后,需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。下面介绍几种鉴定方法: 透射电镜鉴定法:透射电镜,全称为透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称 TEM),分辨率为 0.1~0.2 nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,用于鉴定样本中是否存在外泌体样结构,即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。 图四 外泌体电镜图 浓度粒径检测法:纳米颗粒跟踪分析法,简称 NTA(Nanoparticle










