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- 详细信息
- 文献和实验
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冷藏
- 保质期:
长期
- 英文名:
T4 DNA ligase
- 库存:
451
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京T4连接酶促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京T4连接酶促销
英文名:T4 DNA ligase
规格:100U
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
本T4 DNA Ligase是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。
产品组分:
T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml
50%PEG Solution————————————0.15 ml
活性定义:此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1个CEU单位定义为在20μl的连接反应体系中,在16℃30分钟内,能使50%的经HindIII消化的λDNA片段连接所需的酶量。
注意事项:
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率,转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
储存条件:-20℃。
北京T4连接酶促销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·2×Long Taq PCR MasterMix
编号:RFT092
规格:500μl|5×500μl
本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于短链和长链DNA扩增,特别适合于长片段DNA的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基,可以直接用于TA克隆。
质量控制:经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余基因组DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
| 50μl反应体系 | 终浓度 | |
| 2×MasterMix | 25μl | 1× |
| 上游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
| 下游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
| 模板 | ×μl | 10pg-1μg |
| 水 | 补至50μl |
3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序:
三步法:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 1-5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
| 退火 | Tm-5℃* | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 1 min/kb | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
两步法:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 1-5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
| 退火和延伸 | 68℃ | 1 min/kb | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京T4连接酶促销关键词:T4 DNA ligase,RFT168,T4连接酶
·GelHong红色核酸凝胶染料
编号:RFT153
英文名称:GelHong Red nucleic acid gel dye
规格:500μl
本品是一种可以替代*化乙锭(EB)的红色荧光核酸染色剂。与SYBR或EB相比,本红色核酸染料最显著的特性是其在多种条件下的高灵敏性和稳定性。另外相对EB或SYBR,GelHong诱导突变的能力极低。
使用方法:
注意:染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。
1、GelHong预染方法
1.1、将GelHong试剂按1:10000溶于琼脂糖凝胶溶液中,充分混匀。(例如:将5μl GelHong 试剂加入到50ml 凝胶溶液中)。注:由于GelHong 具有出色的热稳定性,可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中,而不用等凝胶溶液冷却后再加入。
1.2、浇制凝胶并使其凝固后上样电泳。
注意:使用这种预先加入染色剂的琼脂糖凝胶,每次不易加入太多的 DNA 样品,否则容易造成饱和现象,可以做多个不同浓度的 DNA Marker,以确定最佳 DNA 上样量。
1.3、紫外下观察结果。
注:如果始终出现拖尾或是条带无法分离的现象,您可以使用后染法对DNA染色,以确认问题是否与染色剂有关。如果使用后染法问题依旧存在,则说明问题与染色剂无关,请尝试减少核酸的上样量后进行电泳。
2、GelHong后染方法
2.1、用H2O将GelHong稀释约3,300倍到0.1M Nacl中,制成3X染色溶液。(例如:将15μl GelHong和5ml的1M NaCl加入到45ml H2O中)。注:GelHong 1X染色溶液同样可用于后染,但其灵敏度要低于3X染色溶液。
2.2、将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙*(代"烯")容器中。缓慢加入足量的3X染色溶液浸没凝胶。
2.3、在室温下轻轻地摇动凝胶板,最佳的染胶时间为30 分钟,这取决于凝胶板的厚度、琼脂糖或聚丙*(代"烯")酰胺的浓度和 DNA 的长短。凝胶越厚或琼脂糖的浓度越高,染色所需要的时间就越长。注:染色溶液至少可重复使用2-3次。如果不是立即再用的话,建议将用过的染色溶液冷藏保存。
2.4、紫外下观察结果。
储存条件:4℃避光,有效期3年。
北京T4连接酶促销关键词:T4 DNA ligase,RFT168,T4连接酶
BTN3671 血液DNAOUT Blood DNAOUT
14375-45-2 脱落酸 Abscisic acid (ABA)
BL1140 BL21(DE3)pLysS受体菌
9003-99-0 Peroxidase(POD) 辣根过氧化物酶
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PY08-064 脑心浸出液肉汤(BHI) 5ml 10支/盒,用于链球菌及其他对营养苛求菌的培养
1404-93-9 Vancomycin 盐*(代"酸")万古霉素
肌红蛋白 2,6-Dichloroindophenol 100684-32-0
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PY06-010 沙门氏菌显色培养基 1000ml,用于沙门氏菌的快速分离与鉴别
BL0684 TMB单组份显色液
我公司正在优惠促销克隆与表达等系列产品,期待您的咨询选购北京T4连接酶促销。
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文献和实验介绍: Catalyzestheformationofaphosphodiesterbondbetweenjuxtaposed5'phosphateand3'hydroxylterminiinduplexDNAorRNA.
目前市场上常见的TA克隆试剂盒,根据连接方法可以分成两种:方法1:以T4连接酶进行连接的方法,这两种方法转化子比较多,阳性率也不错,唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高,一般快速连接方法需要半个小时到一个小时;达到最佳的效果,要过夜连接。方法2:以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法,这种方法的优势是快速连接,在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中,阳性率比较高,这种方法国内也有人模仿。这种方法虽然速度快,但是也有一些缺陷,比如长片段连接效率不如T4连接酶,转化子少
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物,不需将PCR产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理(Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆)。不需在PCR扩增产物上加接头,即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法(Topo TA Cloning Kit)Topo TA克隆原理与TA克隆一样,唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶
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