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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase Kit
- 保质期：
-20℃恒温保存一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
一年
- 规格：
150 U
【产品概述】
SuperStar超保真DNA聚合酶是一种混合酶，具有5’到3’DNA 聚合酶活性和3＇到5＇的外切酶活性(即校读活性)，能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的48倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度，约相当于普通Taq DNA Polymerase的4倍、Pfu DNA Polymerase的8倍。该酶合成能力很强，即使是复杂的模板，也能快速准确的完成反应，尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。使用SuperStar超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3＇端突出碱基，不可直接用于TA克隆。
【适用范围】
高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等。
高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。
【产品组分】
SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase (1.5 U/μl) 100 μl
5 × SuperStar Buffer 0.9 ml x 2
5 × SuperStar High-GC Buffer 450 μl
50 mM MgCl2 450 μl
100% DMSO 75 μl
10 mM dNTPs 160 μl
6*Loading Buffer 500 μl
5 × SuperStar Buffer和5 × SuperStar High-GC Buffer 均含有7.5 mM MgCl2。如反应需高浓度MgCl2，可补加适量50 mM的MgCl2溶液。
【保存条件】
-20℃恒温保存一年
【活性定义】
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
【注意事项】
1. 在50 μl 的反应体系中SuperStar超保真DNA聚合酶使用量为0.5~1.0 U，不要超过2 U。
2. SuperStar超保真DNA聚合酶扩增时延伸速度约为15~30 sec/1 kb，不要超过1 min/1 kb。应根据扩增产物的长度和模板的复杂性设置相应的延伸时间，复杂性较低时（例如：质粒、λDNA）可用15 sec/1 kb的延伸时间；复杂性较高的基因组DNA模板，延伸时间则应为30 sec/1 kb；对于有些cDNA模板，延伸时间可以增加到40 sec/1 kb。
3. SuperStar超保真DNA聚合酶的3’→5’的外切酶活性可降解引物，用酶量过多会导致引物部分或完全降解，电泳检测时产生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTP，再加酶，并立即进行PCR反应。
4. 用SuperStar超保真DNA聚合酶扩增时，当引物长度大于20个碱基，复性温度为Tm＋3℃；当引物小于20个碱基，复性温度为最低的Tm值。建议使用引物终浓度为0.5 μM，如果需要可在0.2~1.0 μM之间，比Taq酶高。
5. SuperStar超保真DNA聚合酶具有极高的热稳定性，变性温度可以高于98℃。我们推荐大多数模板的初始变性温度是98℃，变性时间为30 sec。
6. 在SuperStar超保真DNA聚合酶扩增反应时应使用高质量的dNTP（Cat. No. A113-01），不推荐使用dUTP和其它可诱导产生dUTP或类似物的试剂，通常使用终浓度各为0.2 mM 的dNTP就可以达到比较好的效果。（接下页）
SuperStar超保真DNA聚合酶的PCR产物经过纯化后，可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接，也可先连接到线性平末端克隆载体上（如EZ-Blunt Blunt-end Ligation Kit，Cat. No. T170-01），再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接，应先纯化去除SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase后，再对PCR产物的3’端添加A碱基，加A反应可使用EZ-T™ A-Tailing Kit（Cat. No. T173-01）。
【质量控制】
• 以λ DNA为模板，可以有效扩增20 kb的DNA片段
• 以基因组DNA为模板，可以有效扩增单15 kb的基因
• 无内切酶、外切酶污染
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