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- XY-Bioscience
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
HotStart HiFiTaq DNA Polymerase
- 保质期：
-20℃恒温保存一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
一年
- 规格：
250 U
本产品是抗HiFiTaq抗体和高纯度的 HiFiTaq DNA polymerase的混合制品，适用于对保真度要求较高的10 kb以下DNA片段的热启动PCR反应。抗HiFiTaq抗体的掺入可以抑制高温加热前HiFiTaq的聚合酶活性，不会导致非特异性扩增；高温变性后，抗体与酶分离，HiFiTaq DNA Polymerase恢复催化活性，使特异性结合的引物延伸，从而大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。此外，抗体结合的热启动方法克服了化学修饰和物理阻隔等方法造成的需要延长预变性时间和需要几个PCR循环才能充分释放DNA Polymerase的聚合酶活性的缺点，对酶的损伤最小，使用更为简便。
使用HotStart HiFiTaq DNA Polymerase扩增得到的一部分PCR产物的3＇端附有一个突出的“A”碱基，可直接用于TA克隆。进行加A反应可提高TA克隆的成功率。
用途
• 用于高灵敏度和有较强背景的基因组扩增
• 以基因组DNA、cDNA、质粒等为模板的长片段且需要高保真的DNA片段的克隆、测序
• 半定量PCR实验，微量DNA模板的检测以及RT-PCR
• 点突变
特点
• 高特异性：抗体型热启动，确保高效的常温抑制效果
• 高度灵敏：高纯度的酶带来优良的灵敏性
• 提高产量：特异性的改善可直接提高目标产物的产量
• 高保真性：保真性是Taq酶的3~4倍，不含任何PCR反应增强剂
• 高效扩增：可扩增Taq酶无法合成的长片段DNA，对≤6 kb片段的扩增效率接近于Taq酶
• 操作方便：室温下配制反应体系，热循环仪无需预热
• TA克隆：产物带3＇突出A碱基，可直接进行TA克隆实验
产品组分
| HotStart HiFiTaq DNA Polymerase (2.5 U/μl) | 100 μl |
| 10 × HotStart HiFiTaq Buffer | 1 ml |
保存条件
-20℃恒温保存一年
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
• 以λ DNA为模板，可以有效扩增10 kb的DNA片段
• 以基因组DNA为模板，可以有效扩增10 kb的DNA片段
• 55℃反应10分钟，抗体对HiFiTaqDNA聚合酶的活性抑制效率达95%以上
• 无内切酶、外切酶污染
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文献和实验We report a simple homogeneous fluorescence assay for quantification of DNA polymerase function in high throughput. The fluorescence signal is generated by the DNA polymerase triggering opening of a molecular beacon extension of the template
The Polymerase Chain Reaction (PCR)
. Did He Really Invent PCR? • The basic principle of replicating a piece of DNA using two primers had already been described by Gobind Khorana in 1971:– Kleppe et al. (1971) J. Mol. Biol. 56, 341-346. • Progress was limited by primer synthesis and polymerase
能催化从四种5′-脱氧核苷三磷酸游离出焦磷酸而使DNA进行聚合反应的酶。EC2.7.7.7.。必须以DNA为模板，合成的DNA与模板具有互补的碱基排列（碱基互补性）。是与DNA复制和修复有关的重要的酶，虽可从许多组织分离出来，但对大肠杆菌的这种酶的研究较为先进。康伯格（A.Kornberg，1958）最初从大肠杆菌将此酶纯化，并弄清了其结构和特异性，但以后经过分子遗传学的研究，已明确了这种酶主要与DNA修复有关。因此重新进行与DNA复制有关酶的检索，发现两种新的酶。康伯格最初发现的酶称为
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