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合研生物
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稳转细胞系构建
武汉合研生物医药科技有限公司坐落于光谷生物城,是一家专注于提供新药发现阶段的技术服务,以中小微新药研发企业为服务主体的创新型公司。合研生物拥有一支训练有素的药物研发技术团队,提供的服务覆盖虚拟筛选、酶学靶点筛选、抗肿瘤药物活性评价、细胞功能学检测、药理病理学服务等各项技术。我们的技术团队在分子生物学、细胞生物学、结构生物学等领域具有丰富的经验,通过酶水平、细胞水平测定等技术平台帮助客户进行化合物筛选及化合物特性、作用机制等研究。合研生物以高效、高性价比的专业服务帮助客户更快地达到目标,帮助客户推进药物发现的进程。
我们的服务
重组细胞株是新药研发过程中常用的研发工具,相对于原代细胞模型,重组细胞模型易大量获得,信号稳定,更适用于新药研发的早期筛选。合研生物提供稳定细胞系构建的服务,包括各个类型的GPCR和报告基因等功能检测细胞系以及一些蛋白表达的细胞株,如Baf3细胞株上表达突变的激酶靶点等。我们的细胞系都通过功能学的验证和稳定性的测试,能够为客户的药物研发提供很好的支持。
| 构建服务 |
构建目的 |
客户须知 |
| G蛋白偶联受体构建服务 |
以Gq亚型的G蛋白偶联受体为研发靶点的化合物筛选 |
Gq型G蛋白偶联受体重组细胞系构建,基于IP1浓度检测的单克隆细胞模型 |
| 以Gi/s亚型的G蛋白偶联受体为研发靶点的化合物筛选 |
Gi/s型G蛋白偶联受体重组细胞系构建,基于cAMP浓度检测的单克隆细胞模型 |
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| 报告基因细胞株构建服务 |
核受体靶点的化合物筛选 |
基于荧光素酶的检测细胞株构建 |
| 信号通路化合物筛选 |
基于荧光素酶的检测细胞构建 |
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| 带有荧光素酶标记的肿瘤细胞株,用于动物模型构建 |
将荧光素酶表达在特定的肿瘤细胞株上 |
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| Baf3激酶靶点重组细胞株 |
激酶靶点筛选的细胞及动物模型细胞株 |
将突变或融合激酶靶点构建于Baf3细胞株上,用于体外或动物模型构建 |
| 蛋白表达细胞株构建 |
表达特定蛋白或受体的模型构建 |
将特定蛋白或受体构建于一般母细胞或肿瘤细胞株上,仅作为蛋白表达,不做功能检测的细胞株,单克隆或多克隆 |
● G蛋白偶联受体
Gq型G蛋白偶联受体
基于钙流检测的细胞模型,可用于激动剂,抑制剂,正/反向别构调节剂的检测。
基于IP1水平检测的细胞模型,可用于激动剂,抑制剂,正/反向别构调节剂和反向刺激剂的检测。
Gi/s型G蛋白偶联受体
基于cAMP水平检测的细胞模型,可用于激动剂,抑制剂,正/反向别构调节剂和反向刺激剂的检测。
● 报告基因
核受体靶点细胞株
基于荧光素酶检测方法构建核受体靶点的全长或GAL4融合蛋白细胞株,适用于刺激剂及抑制剂的筛选。
信号通路细胞株
基于荧光素酶检测方法构建信号通路检测株,适用于刺激剂或抑制剂的筛选。如NF-kB,AP-1,HIF-2α等。
荧光素酶肿瘤细胞株
利用病毒感染的方法将Luc基因导入特定肿瘤细胞株中,从而使其带有荧光素酶表达基因,用于动物肿瘤示踪模型。
● Baf3激酶靶点重组细胞株
以病毒感染的方法将带有突变位点的激酶基因导入到Baf3上构建重组细胞株。用于体外化合物筛选或动物模型构建。
以病毒感染的方法将持续激活的融合激酶基因导入到Baf3上构建重组细胞株。用于体外化合物筛选或动物模型构建。
● 蛋白表达细胞株构建
将特定蛋白或受体构建于一般母细胞或肿瘤细胞株上,仅作为蛋白表达,不做功能检测的细胞株,单克隆或多克隆。
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文献和实验这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系,可以构建表达细胞系,也能构建敲降细胞系,经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系,一般情况下能够稳定表达最多长一周左右,而稳转细胞系,只要构建成功就能稳定表达,没有时间限制,但是也不是肯定的,一般实验构建的细胞系超过 10 代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来,咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒,虽然已经经过处理,但是一听这名字也觉得渗人,无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础,所以一定
myskite 将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系,有人做过吗,分享一下。 bioenw 我做过miRNA的稳转实验,我们可以进行交流。 版主zhujoker留言: 不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM,也不要变相打广告 myskite 我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体,正在准备细胞。据说,这个实验,细胞爱死
,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多是瞬时转染。非常好,你能区分什么时候需要构建稳转株吗?细胞:需要构建稳转株的,有这些类型:1. 长期在目的细胞中研究基因功能;2. 部分蛋白半衰期极长,瞬时 RNA 只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,想要实现更好的基因干扰效果;3. 想要实验更精准,筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;4. 需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;5. 需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等。以下实验就不需要构建稳定
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