BL21(DE3)化学感受态细胞说明书

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北京百奥莱博供应的BL21(DE3)化学感受态细胞说明书用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多BL21(DE3)化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：BL21(DE3)化学感受态细胞说明书
编号：RFT165
规格：20×100μl
英文名：BL21(DE3) Competent cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

产品特点：
1、T7 RNA聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。
2、适用于T7、T7 lac启动子的表达系统，如pET，pEASY。
3、适用于非毒性蛋白的表达。
4、使用pUC19质粒DNA 检测，转化效率可达10^7 cfu/μg DNA。

注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。

注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

储存条件：-70℃，有效期6个月。

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·λDNA/HindIII(125～23130bp)
编号：RFT026
规格：100次(2×25μg/2×250μl)
本产品是由λDNA经HindIII完全酶切而成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品浓度为0.1μg/μl，已含有1×loading buffer，可直接取2-5μl上样，使用方便。8条带的大小分别为125，564，2027，2322，4361，6557，9416，23130bp。



使用方法：
1.65℃加热5分钟，立即冰浴3分钟，取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。
注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间45分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. λDNA酶切Marker的末端容易由COS末端结合在一起，电泳前65℃预热5分钟能解开结合的COS末端，得到更清晰的电泳图像。如果不预热，23130bp和4361bp会结合形成27491bp的额外片段，同时电泳后4361bp亮度会明显弱于其他片段。
2. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
3. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。


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·5×RNA上样液
编号：RFT189
英文名称：5×RNA loading buffer
规格：5×1ml

·考马斯亮蓝快速染色液
编号：RFT054
英文名称：Commassie Blue Fast Staining Solution
规格：500ml
本考马斯亮蓝快速染色液是以考马斯亮蓝G-250为主要成分，采用新配方配置而成。可用于SDS-PAGE或非变性PAGE胶(native gel)的快速染色。由于配方中不含甲醇、乙酸等物质，因此在整个染色过程中清洁、安全，并且用水即可脱色。整个染色脱色过程只需30分钟左右即可得到清晰可见的结果，灵敏度高，可见10ng蛋白带。

用前必读：
1、使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2、以下“使用方法”是针对0.75mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

使用方法：
1、漂洗：
将电泳后的PAGE胶取下放入微波炉专用塑料容器中，加入适量超纯水(以刚刚覆盖过胶面为适)，微波炉中高火(700-800瓦)加热，至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤2-3次；弃尽水溶液。
2、染色：
加入适量染色液(用量根据凝胶面积的大小及容器大小而定，以浸没胶面为准)，放入微波炉中高火(700-800瓦)加热，溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤数次，直至蛋白条带清晰可见时即可停止加热；弃去染色液(收集到备用容器中，可以反复利用1-2次)。
注：
a.此步骤是染色的关键步骤，染色停止的标准是-条带清晰可见。如由于挥发导致染色液减少，可适当补加染色液。
b.如使用1.0mm或更厚的凝胶，染色煮沸时间会相应延长。
3、脱色：
加入适量超纯水(以刚刚覆盖过胶面为适)，放入微波炉中高火(700-800瓦)加热，至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤1-2次，此时PAGE胶的蓝色背景应已去除。
4、保存：
弃去水溶液，加入适量超纯水，观察和保存染色结果。

注意事项：
1、使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长各步骤的时间。
2、对于SDS-PAGE胶，步骤1的漂洗非常重要，因为残余的SDS会严重影响后续的染色；而对于不含SDS的非变性胶的染色，可以省略步骤1。
3、本染色液可以重复利用1-2次，敏感性没有明显下降。
4、本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。

储存条件：室温，有效期2年。


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SY0223 NRSF-GFP报告基因质粒 NRSF (Neuron-Restrictive Silencer Factor) GFP Reporter Plasmid
BTN60705 一管式植物DNA提取试剂盒 One-tube Plant DNA extraction kit
WE0251 TOP10感受态细胞 TOP10 Competent Cell
SV0746 SwaI限制性内切酶 SwaI Restriction Endonuclease
SY0588 内质网蓝色荧光探针(活细胞) Endoplasmic Reticulum Blue-White DPX, for live-cell imaging
BTN160801 大肠杆菌TG1电击感受态细胞 E.coli TG1 Electroporation-Competent Cell
YT263 YY1凝胶迁移探针(1.75μM) YY1 Probe For EMSA(1.75μM)
SV1478 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )
BTN81105 琼脂糖 Agarose
BTN130552 碱性磷酸酶(偶联级) Alkaline Phosphatase,Conjugation Grade
YT918 BRD4抑制剂(JQ1) (+)-JQ1
HR0135 酵母核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒 Yeast nuclear protein/cytoplasmic protein extraction kit
KFS300 Rapamycin(FRAP/mTOR抑制剂)
SV0053 ApeKI限制性内切酶 ApeKI Restriction Endonuclease
SY0327 细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒 Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
KFS099 新型超灵敏ECL检测试剂盒
YT014 蛋白酶K溶液(20mg/ml) Proteinase K Solution
SV0975 PCR 克隆试剂盒（无感受态细胞）
BTN60305 真菌RNA提取试剂盒 Fungal large-scale extraction kit
BTN140653 50mL亲和层析柱 Affinity Chromatography Colum(50mL)

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