北京现货大肠杆菌DH10B电击感受态细胞批发

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名称：大肠杆菌DH10B电击感受态细胞
编号：BTN160901
规格：50μL×5
英文名：E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
 本电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC 及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效的转入DH10B中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZΔM15 标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。DH10B电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。本感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。
 菌株基因型为：[F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara，leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC培养基等。

使用方法：
1. 将0.1 cm的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的DH10B电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。(注：对于质粒，测定转化效率使用1μl 10 pg/μL的对照质粒pUC19；对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μL，体积不超过5μL/50μL感受态。)
3. 用 200μl 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 向电击杯中加入700μL 不含抗生素的无菌培养基 SOC.，混匀后转移到空EP 管中，37℃，200rpm 复苏60分钟。
6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μL 涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少13小时。

注意事项：
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。
8.转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
9.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
关键词：大肠杆菌DH10B电击感受态细胞,E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell,BTN160901


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编号	名称
BTN80912	大提柱式质粒DNA提取试剂盒
BTN90503	电泳级甘油
BTN3160	RNase A溶液(10mg/mL)
BTN80903	柱式植物RNA大量提取试剂盒
BTN100912A	长效期SDS-PAGE电泳液(＞30 KD)(干粉)
BTN60704	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
BTN140587	B-5固定液
BTN130676	Dicer(RNase III)
BTN60905	MMLV逆转录酶
BTN121104	改良型天狼猩红染色试剂盒
BTN121102	柱式鼠尾DNA提取试剂盒
BTN160688	大肠杆菌TKB1化学感受态细胞
BTN100811	质谱兼容型蛋白银染试剂盒
BTN130502	无内毒素水
BTN140635	XTT细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
BTN100210	dNTP溶液(标记专用)
BTN81209	去离子水
BTN3674	一管式病毒DNA提取试剂盒
BTN100885	X-gal干粉
BTN60302	硫*(代"酸")卡那霉素干粉
BTN70303	绿如蓝核酸染料(UV)
BTN130638	核酸内切酶IV
BTN81027	TRIzol试剂伴侣
BTN3100	RNA长效保存液
BTN60208	硫*(代"酸")卡那霉素溶液
BTN60308	EDTA溶液(RNase-Free)(0.5M,pH8.0)
BTN100103A	裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
BTN81210	Western印迹膜封膜液(NC膜和PVDF膜)
BTN70503X	DNA marker(100-1500bp)
BTN131278	戊二醛磷酸缓冲固定液
BTN130888	石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒
BTN70503T	DNA marker(250-15000bp)