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- 2025年07月14日
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上海经科化学科技有限公司
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活细胞内钙离子检测
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1 实验简介
Fluo-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506 nm处被吸收，可以被氩离子激光的488 nm激发光激发，便于检测。Fluo-3在没有同钙结合的情况下，无荧光产生。但是，在与钙结合后，荧光（526 nm）增强至少40倍。Fluo-3/AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3/AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3/AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506 nm，最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为525-530 nm。
2 实验步骤
1) 用激光共聚焦专用培养皿培养细胞。去除培养基后，用PBS洗涤细胞，然后加入适量含有fluo-3/AM的PBS缓冲液（fluo-3/AM终浓度为0.5-5 µM），置于37℃避光孵育 30分钟。探针浓度和负载时间需要根据细胞类型进行调整，可查阅文献。
2) 用PBS溶液轻洗2次，再加入PBS缓冲液，继续孵育20 min，37℃，确保fluo-3/AM在胞内完全水解成fluo-3。
3) 用LCSM采集荧光信号，激发波长488 nm，发射波长525 nm。
注意： 此处理方法适用于贴壁细胞。如果是悬浮细胞或半悬浮细胞，可低速离心收集细胞后，进行处理，然后取细胞悬液滴在共聚焦专用盖玻片上直接观察。
本公司还提供
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文献和实验的应用 定位、定量 三维重组 动态测量 *活细胞或组织内游离Ca2+浓度的测量 *活细胞内H+浓度( pH值)的测量 *自由基的检测 *药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 应用：细胞膜电位的测量 荧光漂白恢复(FRAP)的测量 笼锁解笼锁的测量 荧光能量共振转移(FRET)的测量 其他应用 1、定位、定量 免疫荧光标记(单标
1：10000），细胞膜对钙的通透性变化对细胞内钙影响很大流式细胞术是一种高灵敏度的自动分析细胞的高新技术，快速而大量地检测单个细胞是它的一大特点。用流式细胞术可以摈弃原子吸收光谱法测定组织钙不能区别细胞内外Ca2+含量之不足，也不似其他方法操作过于繁杂。由于流式细胞术一次测量细胞数量大，故测定结果较为准确，误差小。更由于在活的细胞中进行测定，极有助于生命科学中Ca2+的研究。但在测定过程中应注意以下几点：1、实验器皿选用不析Ca2+的塑料制品，所用试剂选用超纯水配制，以减少本底误差。2、严格控制细胞
胞现象。近年来，数字CCD成像荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜、多光子扫描显微镜、流式细胞仪等技术的发展，使我们不但能够精确地测定出钙离子浓度的变化，还可以得出准确的亚细胞水平空间定位。一、荧光钙离子测定常用技术1、荧光显微镜测定法是一类以荧光显微镜检测为基础的测量技术，可用来分析单独的完整活细胞中钙离子的分布和功能分子动力学。然而，钙离子指示剂的性质易受细胞内环境（如pH）的影响，而且在多种细胞内现象中可见许多分子的浓度、分布、功能会同时或相应地发生一系列变化，为了研究这些细胞内现象的机制并排
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