Dpn I

Dpn I

from Diplococcus pneumoniae

别名:
Dpn I

一般描述

Dpn I需要腺嘌呤残基甲基化才能发挥活性，因此只能消化包含N6-甲基腺嘌呤的G^mATC序列。这样的甲基化序列是由dam甲基化酶产生的。甲基化的这种要求将Dpn I与Mbo I和Sau3A I区分开来，其中Mbo I的活性会被dam甲基化所抑制，Sau3A I不会受到甲基化的影响。并且，Dpn I在识别序列上的切割位点也与Mbo I和Sau3A I不同。
同裂酶
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤，该酶仅在指定位点（*）处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4°C下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl₂、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5（在+ 20°C时）的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比（产生pBR322×Dpn I片段的典型模式）已在分析证书的“Lig”和“Rec”下列出。

特异性

识别位点：GmAT * C
G^mAT * C
限制性切割位点：GmA↓T*C
G^mA↓T*C
热灭活：在65°C孵育15分钟后Dpn I未失活。

应用

在PCR介导突变中，DpnI核酸酶已被用于PCR后的野生型DNA的消化。

质量

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50 μl SuRE/Cut 缓冲液H中孵育16小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5 μg [³H]标记的小牛胸腺DNA与3 μl Dpn I一起溶于总体积为100 μl的50mM Tris-HCl溶液（含10 mM MgCl₂、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5）中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。