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- roche
- 罗氏11636090910
- 2025年11月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
PCR DIG Probe Synthesis Kit
- 保质期：
见产品外包装
- 供应商：
嵘崴达
- 保存条件：
−20°C
- 库存：
需确认
- 规格：
25 REACTIONS
PCR DIG 探针合成试剂盒
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
别名:
probe, DIG system
一般描述
PCR DIG探针合成试剂盒包含碱不稳定性洋地黄毒苷 (DIG)-11脱氧尿苷三磷酸(dUTP)制剂。该试剂盒可方便有效地制备聚合酶链式反应(PCR)所需的高灵敏度DIG标记DNA探针。这一探针可通过PCR方法利用DIG-11dUTP（碱不稳定性）标记。DIG-dUTP:dTTP的比例为1:2。
PCR DIG探针合成试剂盒包含增强高保真DNA聚合酶混合物。这种强大的酶混合物具有校对活性，以10 pg质粒DNA和10 ng基因组DNA为模板，可聚合40 bp至5 kb长的探针。DIG标记探针可稳定储存一年以上。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代核酸放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
应用
利用PCR DIG探针合成试剂盒制备的洋地黄毒苷(DIG)标记DNA探针适于检测Southern和Northern杂交中的低（单）拷贝基因mRNA。DIG标记DNA探针也已用于原位杂交过程中的DNA标记。
可根据探针长度调节提供的dUTP-核苷酸混合物浓度。可在琼脂糖凝胶上快速确定标记效果。
可按照包装说明书中的方案，多次抗体剥离和重新检测。
一次PCR标记反应 (50 μl)制备的探针，通常足够用于20 ml杂交溶液。本试剂盒可进行约25次反应(50 μl)。
包装
1个试剂盒包含6种组分。
质量
每个批次的PCR DIG探针合成试剂盒都在PCR中经过功能呢检测。扩增产品在基因组Southern blot中进行了检测。
在如本包装内插页所描述的PCR条件下，对照反应可生成442bp的扩增产物。由于在PCR过程中DIG-dUTP的多次插入，PCR产物的分子量将会相对于未标记PCR产物略有提高。在将PCR产物杂交至10μg人类基因组DNA后可通过后续的化学发光检测检测到特异性的片段模式。
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文献和实验I采用了显色法，使用显色底物 NBT/BCIP；而Starter Kit II选用化学发光法底物CSPD。 如果您用来合成探针的DNA模板的量比较少或是质量不够高的时候，建议您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针，例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程，通过定量凝胶电泳就可以快速确定PCR标记探针的效率。
DIG (Digoxigenin) labeled RNA probe In situ hybridization protocol
tubes. Heat for 95°C for 2 minutes on a PCR block. This will dehybridize the RNA or DNA probe. Chill on ice immediately to prevent rehybridization. 9. Drain off the hybridization solution. Add 50 to 100 ul of diluted probe per section (ensure
/μl的浓度重悬于DEPC-H2O中，取10μl电泳检测线性化质量，其余于-20℃下保存备用。 五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制(试剂盒提供)： 10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5mmol
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