DNA文库定量试剂盒(Ion Torrent平台)怎么卖

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名称：DNA文库定量试剂盒(Ion Torrent平台)怎么卖
编号：WE0233
产地：国产|进口
规格：1ml|5ml
英文名：NGS Library Quantification Kit for Ion torrent
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液，试剂体系完整，操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合；使用的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

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·细胞周期与凋亡检测试剂盒
编号：WE0326
英文名称：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
规格：50次
  细胞周期与凋亡检测试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒每个样品的细胞数量可以为10-100万。
  碘化丙啶是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
  本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Dyeing Buffer	22.5ml
25×Propidium Iodide，PI	750μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS、95%乙醇和RNase A。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

2、细胞固定：
取4毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时加入1毫升细胞悬液，混匀后4℃固定2小时或更长时间。固定12-24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的乙醇，以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3、PI染色液的配制：
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的PI染色液：

	1个样品	6个样品	12个样品
Dyeing Buffer	0.4ml	2.4ml	4.8ml
25×Propidium Iodide，PI	15μl	90μl	180μl
RNase A(10mg/ml，自备)	1μl	6μl	12μl

注：配制好的PI染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4、染色：
每管细胞样品中加入400μl PI染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5、流式检测和分析：
用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

储存条件：-20℃，避光保存


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ARB10271 人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)含量检测 Human interferon-inducible protein 10,ip-10 ELISA KIT
ARB11137 人肿瘤血管生长因子(TAF)代做ELISA实验 Human tumor angiogenesis factors,taf ELISA KIT
BL1441 1% TMB 溶液
PY02-254  甲**(代"胺")蓝-DNA酶琼脂  100克  
ARB11494 人脂多糖(LPS)elisa检测操作说明书 Human lipopolysaccharides,lps ELISA KIT
3-吲哚丁酸* Levamisole hydrochloride 60096-23-3
EDTA溶液(0.25mol/L,pH8.0)   500ml
ARB12183 大鼠白细胞介素1β(IL-1β)定量分析 Rat IL-1β ELISA KIT
ARB14184 小鼠促黄体生成素(LH)检测服务 
BL0959 胶体金标记兔抗猪IgG抗体
阿斯巴甜 Concanamycin A 22839-47-0
ARB12707 大鼠糖蛋白130(gp130)免费代测 Rat glucoprotein 130,gp130 ELISA KIT
ARB14100 人精浆弹性硬蛋白酶Elisa定量检测 
α-半乳糖苷酶 SP Sephadex C-25 9025-35-8
ARB11895 人磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)尿液中含量检测 Human phospho-inhibitory subunit of nf-κbα,pikbα ELISA KIT
GTBE电泳缓冲液(1×)   500ml
2′-*脱氧尿苷 Poly C 784-71-4
ARB11478 人胰岛淀粉样多肽(IAPP)Elisa分析 Human islet amyloid polyPeptide,iapp ELISA KIT
分子筛4A型 Octyl Sepharose 4FF 70955-01-0
ARB10630 人血清素/血清胺(ST)含量测试 Human serotonin,st ELISA KIT
*佐卡因 (+)-Dibenzoyl-D-tartaric acid monohydrate 94-09-7
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·蛋白酶抑制剂混合物
编号：WE0259
英文名称：Protease Inhibitor Cocktail(100×)
规格：1ml
  本品为蛋白酶抑制剂的混合物，使用时取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷，按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail)，使其在抽提试剂中成1×工作液。

注意事项：
1．蛋白酶抑制剂严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
2．操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

储存条件：-20℃


·水产动物基因组提取试剂盒
编号：WE0182
英文名称：Marine Animal DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适合于从多种水产动物(如鱼类、虾类、贝类等)组织中提取总DNA。纯化过程不需*酚或*仿等有机溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅胶质离心吸附柱上，其他污染物可流过膜，蛋白、PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GTL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

不同水产动物组织提取得率：

样本	建议孵育时间	DNA得率
贝类组织	0.5 h	12-20μg
虾组织	1 h	8-14μg
鱼组织	1 h	15-40μg

操作步骤：
1、取不超过30 mg组织材料，液氮充分研磨后，放入离心管(自备)中，加入200μl Buffer GTL，涡旋振荡15秒。
注意：
1)根据提取的组织不同，起始量也有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20 mg。
2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
2、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋混匀，简短离心，使管壁上的溶液收集到管底。56℃孵育，直至组织完全溶解，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。对于难裂解组织可以适当延长孵育时间。
3、加入200μl Buffer GL，充分颠倒混匀，70℃孵育10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：加入Buffer GL时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4、加入200μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、将步骤4所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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